BNLCL.2小鼠胚胎肝细胞的运输及处理

　　一、细胞简介：

　　细胞名称：BNLCL.2小鼠胚胎肝细胞

　　平台编号:zl-056401

　　细胞特性

　　1）来源：小鼠肝

　　2）形态：上皮细胞样

　　3）含量：>1x106个/mL

　　4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

　　5）规格：T75瓶或者1mL冻存管包装

　　二、运输和保存

　　（1）使用T25瓶充液发送活细胞。

　　（2）收到细胞后，请先在显微镜下检查细胞生长状态，并将T25瓶置于培养箱约6h或过夜后，再次检查细胞状态。若状态良好，可进行细胞后续处理操作，按照以下方式进行。若发现可疑污染物，请及时与我们**联系。

　　细胞用途：仅供科研使用。

　　三、细胞培养步骤

　　培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备DMEM-H培养基(DMEM-H，GIBCO，添加NaHCO31.5g/L)，90%；胎牛血清，10%，添加1%PS。

　　2）培养条件：气相：空气，95%；，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。储存。

　　四．细胞处理：

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中*摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，*拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

　　3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

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