pcr实验室-pcr-南京英瀚斯

DNA测序检测

1. PCR测序反应

(1)取0.2ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂:

所加试剂测定模板管标准对照管

BigDye Mix

1μl

1μl

待测的质粒DNA

1μ 1

pGEM-3Zf ( )双链DNA

-1μ1

待测DNA的正向引物

1μ 1

M13(-21)引物- 1μ 1

灭菌去离子水

2μ 1

2μ 1

总反应体积5μ 1，不加轻矿物油或石蜡油，盖紧PCR管，用手指弹管混匀，稍离心。

(2)将PCR管置于9600或2400型PCR仪.上进行扩增。98C变性2min后进行PCR循环，

PCR循环参数为96C 10s，pcr实验室， 50C 5s，PCR实验室， 60°C4min， 25 个循环，扩增结束后设置4C保温。

2.乙醇法纯化PCR产物

(1) 将混合物离心，将扩增产物转移到1.5ml EP管中。

(2)加入25μ 1/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10min以沉淀DNA。12 000r/min于

4C离心30 min，小心弃上清。

(3)加70%(V/V)的乙醇50μ 1 洗涤沉淀2次。12 000r/min 于4C离心5min，小心弃上清和

管壁的液珠，真空干燥沉淀10~ 15min。

3.电泳前测序PCR产物的处理。

(1)加入12μ 1的TSR于离心管中，剧烈振荡，让其充分溶解DNA沉淀，稍离心。

(2)将溶液转移至盖体分离的0.2ml PCR管中，稍离心。

(3)在PCR仪上进行热变性(95C 2min)，冰中骤冷，待_上机。

4..上机操作按仪器操作说明书安装毛细管，进行毛细管位置的校正，人工手动灌胶和建立

运行的测序顺序文件。

5.仪器将自动进行序列分析，并可根据用户要求进行序列比较。如测序序列已知，可通过

序列比较以星号标出差异碱基处，提高工作效率。

6.测序完毕按仪器操作规程进行仪器清洗与保养。

单细胞RNA测序

单细胞RNA测序也称scRNA-Seq。通常而言，一般的组织细胞RNA-seq实验会产生1000万个读数，如果一个基因的频率**过50RPKM，即每百万读数中每千个碱基中**过50个，这一基因即被认为有表达。泊松分布下，1kb长的基因有**过500个读数和4%的小变异系数，即CV值；哺乳动物细胞通产含有200，000个mRNA，因此至少要用50个单细胞一起才能到达小CV值；考虑到逆转录的效率和环境干扰等因素，为得到准确的表达和细胞种类的识别，需要使用的细胞数量实际要更多。

单核苷酸多态性( SNP )实验

SNP (Single Nucleotide Polymorphisn即单核苷酸多态性 ，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计，在人类基因组中，实时定量pcr，大约每千个碱基中有一个SNP ，无论是比较于度多态性(RFLP)分析还是微标记(STR) ，都要广泛得多。

实验方法原理:

SNP (Single Nucleotide Polymorphisn即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计，在人类基因组中，大约每千个碱基中有一个SNP ，无论是比较于限制性段长度多态性(RFLP)分析还是微标记(STR) ，都要广泛得多。SNP是我们考察遗传变异的单位，据估计，人类的所有群体*约存在一千万个SNP位点。-般认为，相邻的SNPs倾向于一起遗传给后代。 于是，我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点称作单体型( haplotype b大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型(每个具有至少5%的频率)，它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。-个染色体区域可以有很多SNP位点，pcr，但是我们一-旦掌握了这个区域的单体型，就可以只使用少数几个标签SNPs(tagSNP)来进行基因分型，获取大部分的遗传多态模式。

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南京英瀚斯生物科技有限公司的团队实体组建于2013年，前期以“东较生物”运营医学科研外包业务，是南京国有资产监委会参股的，专注于医学科研外包服务的地区**企业。根据团队发展需要，医学科研外包业务自2020年以“英瀚斯”**独立运营。“英瀚斯”为Enhancer音译，寓意“英瀚斯”能像Enhancer在基因表达中起到增强作用一样，促进客户的科研进程，提高实验效率，让客户的科研idea*付诸实施，真正做到“思考留给科学，实验外包出去”！ 公司总部位于南京，在济南、西安、昆明、福州、合肥、乌鲁木齐、银川等地设有办事处，并于2015年在东南大学地区大学科技园内建设有完善的实验研发平台，包括标准动物实验室、细胞学实验室、分子生物学实验室和病理学检测实验室；公司已经通过了ISO9001质量管理体系认证，拥有技术平台，包括：动物实验平台、分子生物学平台、细胞生物学平台、组织病理学平台以及电生理检测等平台，可以为制药公司、医院、科研单位等科研工作者提供整体科研解决方案和医学科研服务。 公司目前拥有多项专li产品及技术，其中发明专li两项，软件著作权八项，实用新型专里三项，商标两件。公司先后获得“江苏省民营科技企业”、“江苏省科技型中小企业”、“江苏省专精特新中小企业”等荣誉资质，连续多年被评为“东南大学地区大学科技园企业”。2019年公司成为江苏省生物技术协会*七届理事会的特邀理事，成立了“李冬冬**工作室”，并获得了南京市“工人成员号”的荣誉称号。 英瀚斯（东较）生物始终以“信誉**，合作共赢”为发展原则提供高质量的医学科研外包服务，我们已经与来自各地几百家医院、企业及科研院所建立了长期的合作关系。南京英瀚斯，医学科研的增强子！合作只是起点，服务没有终点！我们致力于做**的医学科研外包服务商。