生物有机肥产品生产使用现状
细菌类生产用除常见的芽孢外, 还出现了高地芽孢菌、 类干酪乳菌、 屎肠球菌、 盐居固氮菌等新, 其中, 高地芽孢菌和盐居固氮菌普遍存在于土壤环境中, 未见致病性报道, 属风险一级; 类干酪乳菌又名为副干酪乳菌, 虽为风险一级 , 但有从动物受伤部位分离到该菌的报道;屎肠球菌属于乳酸菌类,属风险二级, 建议谨慎使用。伯克霍尔德氏菌是一些具有生物防治、 促进植物生长和生物修复等功能的细菌, 但同时也是可以引起鼻疽、 类鼻疽病的致病菌, 因此真菌伯克霍尔德氏菌属于风险三级, 需做致病性试验, 建议慎用或不用。真菌类生产用菌株主要为丝状真菌和酵母菌。哈茨木霉、 米曲霉、 淡紫紫孢菌、 长枝木霉、 绿色木霉、 棘孢木霉、 黑曲霉、 粉红螺旋聚孢霉、 金龟子绿僵菌等属于生物安全风险等级二级,反硝化菌种价格, 需按照NY/T 1109-2017 《微生物肥料生物安全通用技术准则》 进行毒理学测试。酵母菌主要以酿酒酵母为主, 还有少量东方伊萨酵母、杰丁塞伯林德纳氏酵母 (原产朊假丝酵母、 杰丁毕赤酵母)、 膜醭毕赤酵母、 解脂耶罗威亚酵母等, 属于生物安全风险等级一级, 可免做毒理学试验。
低温生物菌种——菌种分离方法
寄主分离法即从生长有某种真菌的寄主体上(如茯苓、木耳木段)取下木片,进行分离的方法。如木耳制种时,反硝化菌种哪家好,可选朵大、出耳多、质厚的耳棒(即长有木耳的木段)。采集后,削去耳根下的树皮,将其横断面锯成1 厘米厚的木片,反硝化菌种多少钱,在无菌条件下,切去无耳菌丝部分,留下有耳菌丝部分,浸入水中1 分钟,取出再用无菌水冲去木片上的液体。然后,用解剖刀将木片切成0 . 5 厘米的小块,放入斜面培养基内,置24 ~26 ℃下培养,及时淘汰杂菌,选取纯菌丝进行移植培养,即得菌种。
低温生物菌种——菌种分离方法介绍
孢子分离又可分为以下几种方法:
( 1 )褶上涂抹法:选取新鲜、健壮、未开伞、未裂破的子实体,洗净后用75 %酒精表面灭菌2 分钟,甘硝化菌种,然后连同培养基一起放入接种箱内,经熏蒸消毒12 ~ 24 小时,再按无菌操作技术将接种环在子实体菌褶上涂抹,把涂抹后带孢子的接种环在培养基上划线接种,后置于25 ~ 28 ℃恒温箱内培养,可得纯菌种。
( 2 )孢子印采集法:取灭过菌的载玻片、试纸或黑布,置于新鲜、未开伞或未开裂的子体菌褶的下方。经24 小时后,便落下孢子,形成印痕(即孢子印)。然后,用接种环或玻璃棒蘸取孢子,接种在平面或斜面培养基上,进行恒温培养,可得纯菌种。
( 3 )孢子收集器采集法:孢子收集器由玻璃钟罩、培养皿、三角架、搪瓷盘等组成。钟罩下为一搪瓷盘,直径25 厘米左右,盘内先垫衬4~6 层纱布,中央放1 副9 厘米直径的培养皿,大盖口朝下,上放小的,口向上。然后,在上面小的培养皿上放1 只铅丝绕成的三角架,再将带孔的玻璃钟罩盖上,顶上罩孔用棉塞塞好,用纱布包好整个孢子收集器,置于高压灭菌锅或蒸笼内灭菌2小时。
孢子收集器灭菌消毒后,放入无菌室或无菌箱内。然后,用小刀割取1 块4~5 厘米大小的子实体,插在收集器内的三角架顶上(若无孢子收集器,也可用培养皿代替)。再置于温度24 ~26 ℃下培养24 小时,培养皿中便可见到白色粉状物,此即为孢子。此时,可将孢子收集器再移至接种箱内,取出培养皿,盖好,并在培养皿内加入10 ~ 20 毫升的无菌水,使孢子散于本中,成为孢子悬浮液。然后,再用无菌打针筒或吸管吸取孢子悬浮液,接种于试管斜面培养基上,每管注2 ~ 3 滴。置于24 ~ 26 ℃温度下培养5 ~ 7 天,培养基上便可长出白色菌落。待菌落直径有0 . 5 厘米时,选健壮的菌落,再移接于另一试管的斜面培养基上培养。当白色菌丝长满试管时,便得纯菌种。
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