杂交瘤细胞基因测序
杂交瘤细胞有丢失高特异性高活性的风险,或者细胞状态不好乃至。而经过杂交瘤测序,可以获得相应的序列,可以以重组蛋白的方式来稳定获得;从而使得研发或生产者不必以杂交瘤细胞为载体保留该,细胞融合实验报告,而可以以碱基序列的形式进行保存和传播交流、鉴定。同时还可以使用获得的测序结果进行等知识产权方面的申请审批。有时为了进一步大规模生产或进行人源化等生物工程操作/修饰,有必要了解杂交瘤所表达的对应的基因序列以进一步进行生物工程操作与生产。
相较于直接对进行基于蛋白质分析的测序相比,得益于基因测序技术的发展,杂交瘤测序可以提供的结果,防止蛋白测序中如亮氨酸/异亮氨酸较难区分等潜在风险。
细胞培养中常见的污染及解决方法
真菌污染
真菌污染后,培养基一般清澈,保持原色。细丝可以在显微镜下观察到。,一些真菌类似于死细胞碎片,但其中许多清晰可见,看起来像珊瑚,比较*区分。此外,它们会慢慢长出细细的黑色细丝,因为它们生长得比较慢,不像细菌那样*被发现,细胞,一旦发现培养基被污染,它们将很难存活。
解决方法:一旦被真菌污染,果断丢弃,然后对细胞房、CO2 培养箱、器皿和培养基进行消毒。
细胞传代培养
操作步骤
1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,细胞实验外包,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10m培养液终止消化。观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1- -3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培养液塞好橡皮塞,置37°C下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
附:消化液配制方法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250), 加入100ml无Ca2 、Mg2 的Hank"s液溶解,滤器过滤chu菌,4°C保存,用前可在379C下回温。胰酶溶液中也可加入EDTA,使zui终浓度达0.02%。
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