友名生物公司-酵母RNA提取

PCR方法已广泛用于科研，在工业中也有不断扩大应用的趋势，它包括检测一些病原体、检测支原体污染、检测细菌污染以及检测残留宿主DNA等。

PCR在工业中的应用主要存在一个方法验证的问题，尤其是灵敏度的验证。灵敏度不够，就会发生漏检。另外，PCR所直接面对的样本是DNA，而非病原菌或DNA，因此还需要做DNA抽提，这也是要注意的。

因此，如能采用PCR检测支原体并替代药典方法，酵母RNA提取，还是能节省很多时间和精力。但PCR方法的验证需要较为完整。灵敏度验证是一个重要方面。灵敏度不够，就会发生漏检。《欧洲药典》第2.6.7章（EP 2.6.7）和《日本药典》第十七版第G3章（JP G3），都规定，对于核酸扩增法（如PCR）检测支原体，如替代传统的培养法，都要求检测限达到10 CFU/ml。

具体验证可使用10CFU的支原体灵敏度标准品，它一般为冻干粉形式，需要用待测样本的样本基质（需保证里面不含支原体）来复溶，再进行DNA抽提以及PCR检测。如检测的电泳有条带，或者qPCR检测后的Ct值小于40，即表明检测成功。

适用于ＰＣＲ研究的快速提取法：

1 田间剪取植株新鲜叶片5-10ｍｇ(约2ｃｍ长)左右，新鲜叶片放于1 5ｍｌ离心管中，存于冰盒中，根据样品号贴上相应的标签。

2 用剪刀将叶片组织剪细(约0 5ｃｍ长)放在点穴式研板中。

3 加入400μｌＤＮＡ提取缓冲液，用玻棒将叶组织研细，直到液体变成深绿色即可。

4 再加400μｌＤＮＡ提取缓冲液，混合均匀，转入一新的1 5ｍｌ离心管(贴上相应的编号)。

5 加400μｌ氯1仿，混合均匀后，2400×ｇ离心30ｓ，将上清液转入一支新的1 5ｍｌ离心管(贴上相应的编号)。

6 加800μｌ无水乙醇，混匀，2400×ｇ离心3ｍｉｎ。弃上清。

7 70%乙醇冲洗，风干。

8 用50μｌＴＥ缓冲液溶解，存于-20℃。

9 取1μｌ用于ＰＣＲ分析。

甘油三酯（TG）检测试剂盒（比色法），#KTB2200：用异丙1醇抽提取TG，KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸，Periodic acid氧化甘油生成甲醛，在氯离子存在下甲醛与Acetylacetone缩合生成黄色物质，在420 nm有特征吸收峰，其颜色的深浅与TG含量成正比。该试剂盒提供了一种简单的检测方法检测动物组织、细胞、serum（浆）以及植物样本中甘油三酯（TG）的含量水平；而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。

游离胆固醇（FC）检测试剂盒（比色法），#KTB2210：胆固醇氧化酶催化游离胆固醇（FC）生成△4-胆甾烯酮和H2O2，过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在500 nm有吸收峰，其颜色深浅与FC含量成正比。该试剂盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本如动物组织、细胞（细菌）、serum（浆）中游离胆固醇（FC）的含量水平；而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。

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