逆转录病毒滴度测定-武汉友名生物

电1击法

　　电1击法基本原理是电脉冲使细胞膜产生可逆性的“微孔”，外源DNA可通过这些微孔进入受体细胞原生质体内。

　　1985年Fromm等用electric shock法将pat基因导入了玉米原生质体，得到了该基因稳定表达的愈伤组织。随着玉米原生质体再生技术的研究取得进展，1988年Rhodes等用electric shock法转化玉米原生质体，初步获得了完整的转0基因植株。electric shock法还可以对幼胚、愈伤组织和胚性悬浮细胞系进行遗传转化。1992年D’Hallum K等以玉米幼胚和愈伤组织为受体，用electric shock法导入neo基因，获得了可育的转0基因植株，并且neo基因能稳定地遗传给后代。1993年Sukhapinda等用electric shock法转化从玉米花粉愈伤组织分离的原生质体，将gusA和nptⅡ转入原生质体，获得单倍体转化植株。1994年Laursen等以果胶降解酶处理悬浮细胞系后，通过electric shock法导入bar基因，也获得了可育的转0基因玉米。

　　电1击法操作简单，不受宿主限制，在遗传转化技术研究的初期得到了较为广泛的应用，但是它的转化效率较低，而且对有壁细胞或组织的转化效果较差。

腺病毒是无包膜的线性双链DNA病毒，在自然界分布广泛，至少存在100种以上的血1清型。其基因组长约36kb，两端各有一个反向末端重复区（ITR），ITR内侧为病毒包装信号。基因组上分布着4个早期转录元（E1、E2、E3、E4）承担调节功能，以及一个晚期转录元负责结构蛋白的编码。早期基因E2产物是晚期基因表达的反式因子和copy必须因子，早期基因E1A、E1B产物还为E2等早期基因表达所必须。因此，E1区的缺失可造成病毒在copy阶段的流1产。E3为copy非必须区，其缺失则可以大大地扩大插入容量。腺病毒载体大多以5型（Ad5）、2型（Ad2）为基础，新增了55型（Ad55），很多研究机构在研究当中，55型将比5型流行以及应用更具广泛性。

转1基因技术是伴随着对生物体的认识才发展起来的技术，逆转录病毒滴度测定，在生物本身还未完完全全地认识的情况下进行基因层次的修饰，出现预料不到的结果和不确定性与不能解释的情况是肯定的。其造成各种不确定性的来源包括: 基因从原有机体转人宿主有机体中，两者的生理的差异对终产物影响而导致的安全性问题。

转移的基因结构的稳定性。确保经遗传修改的生物已获得要表达良性性状所需的zui小DNA部分片段，由于DNA结构的稳定有助于性状表达的稳定，额外的DNA部分片段可能导致基因沉默或终产物的表达不稳定，甚至产生不需要的性状或有毒物质。 基因插人受体基因组的位置和拷贝数的不确定性。无论是农杆1菌介导法、基因法、花粉管通道法、PEG介导电1击法等，质粒在进人宿主基因组的位置与数量均是不确定的，目的基因的表达量难以预料，同一批的转1基因材料可能存在差异。

转1基因载体引起的不确定性。食用具抗生1素耐药性的选择性标识基因可能会影响人的抗病能力。Netherwood等分别让7个肠道炎的和12个健康的志愿者食用添加转1基因大豆(EPSPS)的汉堡和豆奶昔，虽然在12个健康个体的粪便中没有发现转1基因，但在7个肠道炎志愿者的xiao肠中都发现了转1基因，其中的3个出现有转1基因向肠道微生物转移的现象，即有可能抗生1素标记会转移到肠道微生物上。

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