鼻咽拭子的采集
被采集人员需要 保持头部不动,采样人员去除鼻腔内壁的分泌物。然后采样人员一手轻扶被采集人员头部,一手将鼻咽拭子缓缓插入鼻腔至鼻咽部。在鼻咽部,拭子将停留数秒吸取分泌物,而后采样人员轻轻旋转取出拭子,将样本保存并送检。
咽拭子的采集
被采集人员先用 生理盐水漱口,采样人员将拭子放入无菌生理盐水中湿润。被采集人员头部微仰并保持不动,嘴张大,并发“啊”音,露出两侧咽扁桃体,采集人员将拭子越过舌根,在被采集者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次,然后再在咽后壁上下擦拭至少3次。
需要注意的是,两种采集方法, 被采集人员均会稍感不适,所以在采样的过程中,被采集人员需稍稍克服一下不适感, 配合采样人员的工作。不可过度活动头部,以免拭子划伤粘膜。如被采集人员发生刺激性咳嗽,采集过程需稍作暂停。
为什么用无水乙醇沉淀DNA
用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中较常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,PCR产物回收, 乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的zui终含量占67%左右。 因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。
但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大, 尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵, 后面的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙1醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。
转移RNA
转移RNA(tRNA)在蛋白质合成过程中负责转运氨基酸、解读mRNA遗传密码。tRNA占细胞总RNA的10%~15%,绝大多数位于细胞质中。tRNA由Crick于1955年提出其存在,Zamecnik和 Hoagland于1957年鉴定。
tRNA一级结构具有以下特点:
①是一类单链小分子RNA,长73~95nt(共有序列76nt),沉降系数4S。
②是含稀有碱基zui多的RNA,含7-15个稀有碱基(占全部碱基的15%~20%),位于非配对区。
③5′末端碱基往往是鸟piao呤。
④3"端是CCA序列,其中的腺苷酸常称为A76,其3’—OH是氨基酸结合位点。
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