A.差速离心:逐次增加离心力,每次可沉降样品溶液中的一些组份。 差速离心是一种常用的方法。在这种方法中,离心管在开始时装满了均一的样品溶液。通过在一定速度下一定时间的离心后,就可得到两个部份:沉淀和上清液。 通常在**次离心时把大部分不需要的大粒子沉降去掉。这时所需的组份大部分仍留在上清液中。然后将收集到的上清液以较高速度离心,把所需的粒子沉积下来。离心的时间要选择得当,使大部份不需要的较小的粒子仍留在上清液中。对于得到的沉淀和上清液可以进行进一步的离心,直到达到所需要的分离纯度为止。 差速离心的特点是操作简单,但分离纯度不高。 B.密度梯度离心法:可以同时使样品中几个或全部组份分离,具有很好的分辨率。 (1)速率区带法(ratezonal): 根据样品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S)。大致步骤如下: 在离心管中装入密度梯度溶液,溶液的密度从离心管**部至底部逐渐增加(正梯度)。 将所需分离的样品小心地加至密度梯度溶液的**部。样品在梯度溶液表面形成一负梯度。 由于不同大小的粒子在离心力作用下,在梯度中移动的速度不一样,所以经过离心后会形成几条分开的样品区带。 注意:样品粒子的密度必须大于梯度液注中任一点的密度。离心过程必须在区带到达管子底部前停止。 (2)等密度离心法(isopycnic): 根据粒子的不同密度来分离。离心过程中,粒子会移至与它本身密度相同的地方形成区带。 密度样度的选择要使梯度的范围包括所有待分离粒子的密度。样品可以在密度梯度液粒上面或均匀分布在密度梯度中。经离心后,样品粒子达到它们的平衡点。 注意:平衡后粒子的分离完全由其密度决定,与时间无关,此时再改变离心转速,只能改变区带的相对位置。 密度梯度分析法 梯度介质性质与选择: A、应具备的性质: 梯度物质的选择原则是满足分离方法的基本要求,一个理想的密度材料标准它应是: 所形成的溶液密度应包括所需要的密度范围。 具有某些性质,如折射率,据此可测定它的浓度。 所形成的溶液粘度低。 不损伤所分离的样品。 离心分离后容易除去。 不妨碍分离积分的分析。 B、常用介质种类: 表一、常用梯度材料在20℃密度 B.梯度介质应用范围: 表二、等密度梯度介质的应用 表三、各种大分子在蔗糖梯度液中的大约密度 (2)、梯度溶液的准备: 计算,稀释 (3)梯度形状 梯度形状分:线型、等速型、阶梯型、平坦型、陡峭型指数梯度。 梯度形状对于分离是否成功非常重要: 常用的是线型梯度,适用于分离蛋白质、酶、激素、核糖体亚基和一些植物病毒;等速型适用于分离脂蛋白和一些需上浮分离样品;不连续或阶梯型梯度适用于分离整细胞、亚细胞组分以及纯化一些哺乳类动物病毒或昆虫病毒。等速梯度以及长液柱可增进分离能力,适用于分离核糖体亚基、多核糖体及植物病毒。 B.梯度柱制备: 梯度液柱可以用手工或梯度仪制备 半注法: 为缩减离心时间,或分离样品较少可用半注法:下半管铺置梯度介质,中间加样品,上面铺Buffer或液体石腊油。 (4)加样方法与加样量: 将样品加到梯度液柱上,针尖和离心管成45-60°角度,慢慢地将样品沿管壁流到液面上去,对于DNA一类易断的脆弱样品,应该用孔径较大的移液管代替针头,以避免剪切力对样品的切割作用。样品浓度是梯度柱小密度的1/10(W/W)。 (5)转子的选择与效应: (6)分离区带的回收及检测 离心后所形成的区带样品的回收方法基本有四种: a.穿刺法 穿刺离心管底部,使梯度溶液滴出,将一具有合适阀门的盖帽放在离心管**,可控制滴出速度。 b.虹吸法: 将一毛细管轻轻插入管底,尽量防止梯度抖动,用微量泵逐渐滴取,以一定量滴数或体积部分收取。 c.加压法: 通过一针管将高密度的液体泵入到梯度离心管的底部,部分收集换出的溶液。 d.切割法: 采用的切割刀切割所需区带。区带检测: 所谓区带检测,实际上是对水平转子或角转子和垂直转子离心管中的分离物质所做的监测,通常只是测量在260或280mm时长的吸收值,以决定梯度中的核酸或蛋白的整个分布,这个操作通常称之为在线(online)监测。离心机的氮气有什么用?下面小编为大家解答。离心机自面世以来,历经低速、调整、**速的变化,其中止首要表现在离心设备和离心技能两方面,二者相得益彰。从转速看,台式离心机根本属于低速、高速离心机的领域,因此具有低速和高速离心机的技能特性,其结构首要由电机驱动体系、制冷体系、机械体系、回头和体系操控等几部分组成,与落地式离心机比较只不过是尺度和容量小一点罢了。现在普遍选用的离心机的氮气保护,实践上只是在机壳上设置了一个氮气进气管,一个氮气出气管,离心机在作业时,对内腔中充人氮气。氧气,一般选用惰性气体保护,通过向离心机内部充人氮气置换里边的空气,从而使氧气浓度维持在安全规模之内。至于氮气浓度能否抵达安全规模则没有定量的操控,因此,其氮气保护的可靠性很差。一种改进的氮气保护体系规划中设置在线氧气检测装置和压力变送传感器,对工作过程中的离心机内腔的氧气浓度停止检测,实施定量的操控,操控其氧气含量在安全规模以内(也即保证机内的氧气浓度在易燃易爆介质的爆破极限之外。以上内容就是离心机的氮气作用了,希望对大家有所帮助。常用的几种离心机转子的使用寿命有哪些问题?一起来看一下。离心转子是离心机的**部件,离心机中所有系统的配置都是为了确保转子在一定条件下安全运转。转子不仅直接影响分离效果,它也是离心机技术中的主要受力部件,对离心机的安全较为重要。那么常用的几种离心机转子的使用寿命有哪些内容?常用的几种离心机转子的使用寿命有哪些问题?高速和低速离心机转子则简单地用年限来规定转子寿命,铝合金转子一般为7年。这显然不很科学,部分制造商同时采用运转次数或运转时间记录。如果某个转子几乎天天使用20h,那肯定不能用7年。而离心机买了多年没用,但已到厂家规定的7年,对这样的转子学者大部分认为还是可用,只是适当降速即可。由于离心样品大都具有腐蚀性,就连普通的自来水对铝转子都有腐蚀。在应力腐蚀与化学腐蚀共存下产生双重腐蚀疲劳,可导致转子的实际寿命比保证寿命减少。为了避免发生这种情况,用户应经常仔细观察容易发生腐蚀的转子部位,如试管孔底部、转子底部与主轴连接处,以及转子上部大螺纹处等。对**速离心机转子,一般规定铝转子运转1000~1500次或1000~1500h,此后要降速10%使用同样的次数和时间;钛转子保证使用5000次或10000h,若有些转子长期不用,其内部金属组织会发生变化,也应降速使用。厂家保证期限为5年。因此,要求使用者必须坚持记录每个转子的运转次数和累计运转时间。由于科技的发展,**速离心机转子有内镶嵌的智能记忆系统,自动完成累计记录,用户不用自己做记录。平板离心机选用优质实心钢材主轴,不锈钢卷圆外壳内胆,因此工作平稳而且耐磨耐腐蚀,清洗起来也很方便。食品工厂将蔬菜粉碎后,仍然会含有很多水分,这时需要脱水设备来帮助进行作业。其间平板离心机是较为受欢迎的一种脱水设备,下面小编就为大家进行详细讲讲该设备的结构特点。平板离心机的结构及特点:1、平板离心机由三足机座、304不锈钢桶体、电机、离心离合器、刹车等部件组成;2、平板离心机主轴选用优质实心钢材,选用双轴承组合,轴承位于脱水仓锥度内,确保工作平稳,以削减磨损,节约动力;3、平板离心机外壳、内胆均选用不锈钢卷圆,内表面坚固光滑,具有耐磨耐腐蚀,清洗方便等到优点;4、平板离心机选用了独立电机,经过三角胶带传动,装有离心式起步法兰,机械缓步发动,制动效能高,手动刹车能使转鼓敏捷停转,可防止主轴因制动而受到扭力;5、三足悬摆式机座可防止因转鼓内载重不平衡而产生地脚振动;出水管在底座下方,可对接水管、水槽排水。
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