转基因食品中PAT基因核酸检测试剂盒

本试剂盒采用实时荧光PCR技术，针对PAT基因的核酸序列设计特异性引物和探针，通过实时荧光PCR 反应对转基因成分进行定性检测。本试剂盒适用于大豆、玉米、番茄、马铃薯、水稻、小麦等农产品及其加工产品中转基因成分的定性PCR检测，加工产品不包含食用油脂和调味品。

参考标准

         行业标准SNT 1202-2010
产品规格

        40次/盒
主要成分 
成分 	规格
PCR反应预混液 	900ul× 1支
阳性对照 	50ul×1支
阴性对照 	50ul×1支
储存条件

本试剂盒保存于-20℃，有效期12 个月
检测步骤

1.样本处理

采用均质器、搅拌机、研钵等实验器皿对样本进行均质处理。

2.样本DNA提取
 采用商品化的植物基因组DNA提取试剂盒，按照试剂盒说明提取样本 DNA。对提取的 DNA 进行浓度测定， DNA 溶液的OD260/280 比值在 1.7-2.0 为较佳。

3.试剂准备

冰上解冻反应试剂，反应液保持避光，解冻后将反应液混匀并简短离心，按每管22ul的量分装至 PCR 管中。

 4.PCR加样

每管中加入DNA样本 3ul （ DNA 浓度为50ng/ul 左右），盖好管盖，简短离心，同时做阳性对照，阴性对照和空白对照（以水代替样本 DNA ）。

5.PCR扩增

将加好的样品放置在PCR仪中， 荧光通道选择FAM， PCR 反应参数见表，使用不同的 PCR仪，反应参数可适当调整。
温度     	时间 	循环数 	是否收集荧光
50℃ 	2min  	1个循环 	否
95℃ 	10min  	1个循环 	否
95℃ 	15s 	40个循环 	否
60℃ 	1min 	是

 6.结果分析

基线和阈值的设置：基线范围设置在3-15个循环，阈值设置在基线刚好**过阴性对照扩增曲线的较高点。

质量控制：阳性对照CT≤30，有S 型扩增曲线；阴性对照无CT值，扩增曲线为直线；空白对照无CT值，扩增曲线为直线。若出现任一结果不正常，需重做实验。
结果判定

1.检测样品无CT值，曲线为直线或无 S 型扩增曲线，判定结果为阴性。

2.检测样品CT≤36，出现S型扩增曲线，判定结果为阳性。

3.检测样品36﹤CT ﹤40并有S型扩增曲线，需适当增加DNA模板量后重新做实时荧光PCR检测，再次检测结果CT值仍处于36和40之间，并且有S 型扩增曲线，判定结果为阳性，否则判定为阴性。 
较低检测限    0.1%
注意事项
1.初次使用前请仔细阅读说明书，并严格按照说明书进行操作。

2.实验操作要严格分区，防止污染。

3.建议先用实时荧光PCR法检测内源基因来判定样本提取的 DNA 是否满足 PCR检测要求。

4.反应液反复冻融会降低灵敏度，建议分管保存。

 5.本试剂盒仅供定性筛查用。

陕西瑞奇生物科技有限公司成立于2005年，是由*四军医大学的*教授创办的一家民营高科技企业，注册地址位于西安市高新开发区，注册资金135万元。公司作为一个研发型的企业，从成立之初一直致力于人类健康和食品*检测领域的*检测、基因检测、生化检测等检测试剂产品的研究开发。
几年来公司和工程技术研究中心已承担二十多项地区、省、市级产品研发或科学研究项目，获得科研经费900余万元，先后被认定为地区**企业（No. GR201761000610）和西安市**企业（XAG），陕西省科技型中小企业（No. 201861019608000382）和陕西省民营科技企业（SXKQ-A2016080034）。