处理步骤简短流畅 济南磁珠法提取

如果血浆病原DNA提取试剂盒中提取的DNA溶液OD260/OD280比值小于1.6，通常说明有蛋白质或酚、多糖等的污染；如果提取的DNA溶液OD260/OD280>1.9，则表明有RNA污染。
血液游离DNA（又称血液循环DNA）是指血液中游离于细胞外的DNA，其来源主要有三：白细胞崩解释放的DNA、坏死组织特别是肿 瘤组织释放入血液的DNA和感染病毒等的DNA。近几年来，随着基因诊断技术的发展，游离核酸的应用**越来越大，如优生筛查、早期诊断、遗传病检测和病原体感染基因检测等。但血液中游离DNA含量一般较低，片段较小，不易提取，这大大影响了游离核酸的基因检测和各种研究的开展。

游离DNA提取方法一般有TRizol方法、离心柱法、磁珠法。其中，Trizol方法与离心柱相比，提取效果相当，但是因其对操作者带来的毒性，现在越来越被弃用。磁珠法比较适合机器自动化提取，如果没有核酸提取仪，只是使用磁力架配套提取，磁珠法的操作就比较麻烦且容易导致样本交叉污染。另外，根据研究，磁珠法的核酸提**率不如离心柱法。如果要提取的游离核酸的量比较低，选择离心柱法。对于游离DNA含量较低的样本或比较珍贵的样本或样本总数不是很多的实验室，核酸提取方法应是离心柱法。

血浆病原DNA提取试剂盒的操作步骤：
1、取出洗涤液，按以下操作：
洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇，混匀。
洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇，混匀。
配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
2、取1.5mL离心管，加入200μL血液样本，再加入200μL 裂解液及40μL 消化液，振荡混匀，65℃水浴10 分钟。
3、加入150μL异丙醇（总体积的25%），混合均匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。
4、将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液；
5、将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。
6、将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。
7、按每份样本40μL 取洗脱液，放置于灭菌1.5mL离心管，65℃预热。
8、将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
9、取出吸附柱，放入新的1.5 mL 灭菌离心管内，在吸附柱中心加入40 μL 预热洗脱液，静置2分钟，12,000 rpm 离心1分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

血浆病原DNA提取试剂盒使用注意事项：
1、裂解液、洗涤液含有一定性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入鼻和口中。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。
2、如血液量不足200μL，请用0.85% 生理盐水补至200μL；如血液量**出200μL，请使用中量血液DNA提取试剂盒或血液富集DNA提取试剂盒。
3、如果提取的血液为鸟类、禽类的血液，因有核红细胞较多，提取血液量应适当减少，研究者应该进行优化实验，选择合适用量。
4、提取的DNA如暂不使用，应-20℃保存。

一般来说，血清血浆的量与提取的核酸量成正比。因而，如果要提高核酸得率，可通过增加血清或血浆的量来实现。一般地，做血浆或血清核酸提取，样本量在1ml以上。如果1ml或较大量样本得不到满意的检测结果，则应及时考虑更换提取试剂盒。血浆病原DNA提取试剂盒的核酸提**率较高，1ml病人血浆样本DNA得率在85ng左右，Q的得率在72ng左右，T的得率在63ng左右，基本上都能满足下游PCR实验的需求。其检测下限为2ng/ul。如洗脱液为30ul，则需要1ml左右的血浆才能检测出来。显然，如果是健康人的血浆，1ml血浆的DNA浓度较低。因而，血浆DNA提取完成以后，应该直接做PCR。

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