体液病原DNA提取试剂盒操作简单、快速,所得病原DNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质,可直接用于PCR、RT-PCR、 Real-Time PCR 、印迹等分子生物学实验。
体液病原DNA提取试剂盒的产品特点:
1、不需要使用试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2、节省时间,简捷,单个样品操作一般可在几十分钟内完成。
3、多次柱漂洗确保高纯度,提取的病毒DNA纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种操作,包括PCR、酶切、杂交等。
体液病原DNA提取试剂盒的操作步骤:
1、200μl血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9%NaCl或者PBS补足)转入上述1.5ml离心管,加入400μl裂解液DLB,立刻涡旋振荡充分混匀。
2、室温(15-25℃)放置10分钟,每隔5分钟,振荡混匀一次。
3、加入450μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境**25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
4、将上述混合物加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。如果总体积**过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱AC中。
5、加500μl去蛋白液RE,12000rpm离心30秒,弃废液。
6、加入500μl漂洗液WB,12000rpm离心30秒,弃废液,加入500μl漂洗液WB,重复一遍。
7、将吸附柱AC放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8、取出吸附柱AC,放入一个新的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μl洗脱缓冲液EB(事先在65-70℃水浴中加热效果较好),室温放置1分钟,12,000rpm离心1分钟。如果想得到较多量的DNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm离心1分钟。洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要的DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是至小体积不应少于20μl,体积过小降低洗脱效率,减少DNA产量。
9、DNA可以存放在2-8℃,如果要较长时间存放,可以放置在-20℃。
体液病原DNA提取试剂盒用于从各种液体样品中提取DNA的试剂盒。可以处理各种液体样品(血液,血清,血浆,脑脊液,淋巴液,细胞培养上清液等)、单个或少量的细胞等。提取的DNA与PCR、荧光PCR、RT-PCR、荧光RT-PCR等后续反应兼容。
试剂盒特点:
1.DNA的回收率高。
2.一管式操作,减少了样品污染的可能。
3.一站式套装,降低了实验误差。
4.安全无毒,不需要使用一些溶液。
5.试剂稳定,可以长期放置。
体液病原DNA提取试剂盒组成成分:
1、裂解液DLB;
2、去蛋白液RE;
3、漂洗液WB;
4、洗脱缓冲液EB;
5、吸附柱AC;
6、收集管。
体液病原DNA提取试剂盒结合在硅基质膜或磁珠表面的DNA,经含醇的盐溶液漂洗可进一步去除细胞残片、非特异吸附的蛋白质和过浓的盐离子,再经纯水等洗脱液即可将纯度较高的DNA洗脱下来,进而应用于下游实验中(如pcr、酶切、连接、测序等);通过酚仿释放至溶液中的核酸,可通过调节酸碱度后加入高浓度醇溶液沉淀出来,再经醇溶液洗涤晾干后即可获得高纯度DNA。
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