使MSI检测的灵敏性、特异性和检测的便利度都有了明显进步。3.错配修复蛋白免疫组织化学检测与PCR-MSI检测的优缺点:文献报道错配修复蛋白免疫组织化学检测与PCR-MSI检测结果的符合率非常高,达%,因此采用任何一种方法作为MSI-Hliu的筛查方法均可接受。相比之下,免疫组织化学法:(1)简便,山东作用dMMR抗体检测试剂推荐咨询、经济、快捷、稳定,符合病理科日常工作流程,多数基层病理科均可开展;(2)所需组织量少,活检标本亦可检测,且检测结果与切除标本检测结果一致;(3)可直接提示发生缺陷的错配修复蛋白类型,对于后续进行错配修复基因胚系突变检测以确诊Lynch综合征有明确的指向性;(4)少数MSH6胚系突变病例的liu由于错配修复系统的功能冗余作用可不表现为MSI,但免疫组织化学可检出蛋白表达缺失,因而可弥补PCR-MSI检测方法的局限性。PCR-MSI检测虽然相对复杂,费用相对较高,但优点是直接反映liu的MSI状态,而且对于少数错义突变导致蛋白功能异常但并不影响蛋白的转录和抗原性时,免疫组织化学检测可出现假阳性,山东作用dMMR抗体检测试剂推荐咨询,山东作用dMMR抗体检测试剂推荐咨询,而PCR-MSI检测正好可以弥补。四、***检测MSI结直肠ai的必要性及推荐检测流程区分MSI结直肠ai的临床意义包括以下三个方面。1.提示预后:临床研究发现,在Ⅱ期结直肠ai中。迈杰转化医学设有病原体检测平台Qiastat-Dx进行呼吸道及胃肠道病原体检测。山东作用dMMR抗体检测试剂推荐咨询
当liu细胞出现一种或几种错配修复蛋白核表达的丢失,则提示liu为MSI-H。MLH1和MSH2作为错配修复复合体的共用亚单位,在发生功能缺陷时常同时伴有其同源错配修复蛋白的表达缺失。另外,如前所述,部分Lynch综合征是由于EpCAM基因胚系突变导致下游MSH2基因功能缺陷所致。Musulen等发现,在MSH2表达缺失的liu中检测出EpCAM蛋白缺失,与EpCAM基因突变的吻合率达100%,所以推荐将EpCAM免疫组织化学检测加入到Lynch综合征的筛查流程中。日常工作中用于鉴别肺腺ai与恶性间皮瘤的抗体Ber-EP4即是检测EpCAM的常用克隆之一。免疫组织化学检查错配修复蛋白表达缺失的作用如下:(1)提示哪个错配修复基因发生了功能缺失(表1);(2)与MLH1启动子甲基化检测和/或BRAFV600E突变检测结合,区分散发性MSI-H结直肠ai和可疑Lynch综合征患者;(3)与EpCAM免疫组织化学检查结合,为后续的Lynch综合征遗传学突变检测提示方向。目前,4种主要的错配修复蛋白MLH1、MSH2、MSH6、PMS2均已有稳定的商品化抗体,但受组织固定、染色条件、抗体克隆号不同等因素的影响,可能会出现假阳性或假阴性结果。在判读免疫组织化学染色结果时应注意:(1)内对照是否阳性;(2)着色部位是否为细胞核;。黑龙江个性化dMMR抗体检测试剂迈杰转化医学目前已完成约30+靶点的方法学验证,50+靶点的方法学建立。
1:1000稀释)4℃孵育过夜。用tbs-t洗膜后,加入1:5000稀释的羊抗鼠二抗,室温孵育1小时。再次tbst洗膜,加入ecl超敏显色液(北京普利莱基因技术有限公司),以chemidocmp多色荧光成像系统(bio-rad)进行化学发光图像数据的采集。实施例5组织芯片染色和鉴定一、芯片制备过程对各样本先进行he切片染色,以确定liu部位。对liu靶位点画圈,预备打孔。制作空白受体蜡块时,将塑料架置于模具上,将融化的石蜡(熔点在55~58℃)倒入模具,冷却至室温后将模具放入-20℃冰箱6min,将蜡块从模具中取出。在组织样品机上选择1mm直径的样品针在受体蜡块上打孔,孔深3~4mm,用另一直径1mm的打孔针在蜡块的标记部位打孔采集组织芯,其长度比受体蜡块的孔深浅。将采集到的组织芯直接插入或用镊子小心夹取插入受体蜡块的空孔内。如此反复直至完成全部样品点的制备。***用载玻片将所有组织芯按平,使组织芯片蜡块平坦光滑。将制成的组织芯片蜡块再放入蜡块制作模具,放入60℃烤箱内15min,使组织芯与受体腊块的蜡融为一体,然后轻轻从烤箱中取出模具,让半融状态的石蜡在室温条件下冷却约30min,再放入-20℃冰箱冷冻6min后将组织芯片蜡块从模具中取出。
可能是由于蛋白的不稳定造成的。目前,其用途主要为:联合检测msh2、msh6、pms2、mlh1可用于lynchsyndrome(遗传性非息肉性结肠ai)的筛查。技术实现要素:发明人提供了一种抗msh6蛋白单克隆抗体,所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是。进一步地,所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是。进一步地,所述单克隆抗体特异性识别msh6蛋白。进一步地,所述单克隆抗体由保藏号为cgmcc**7492的杂交瘤细胞系产生。所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系abm58060-20a2-pu,分类命名为:小鼠杂交瘤细胞系,该细胞系已于2019年04月3日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。进一步地,所述抗msh6蛋白为小鼠igg2b亚型单克隆抗体。发明人还提供了一种抗msh6蛋白单克隆抗体的制备方法,其免疫小鼠所用的抗原为seqid**所示核苷酸序列编码,经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。发明人还提供了一株分泌抗msh6蛋白的杂交瘤细胞系,所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系abm58060-20a2-pu,所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为:cgmcc**7492。迈杰转化医学拥有全技术平台及丰富的伴随诊断开发经验,为药企合作伙伴提供一体化开发服务。
在临床中,对于Ⅱ期结肠ai病人,考虑使用5-Fu单药化疗时,主要考虑因素是什么?可能有的医生会说,「Soeasy!检测下MMR啊,看看是dMMR还是pMMR」。来吧,我们看1个病例患者女,51岁,诊断为T3N0M0(伴有普危因素),免疫组化结果:HER2(1+),GPC3(-),MSH2(+),MSH6(+),PMS2(+),MLH1(+),CK19(-),CK20(+),Ki67(60%+)。这名患者该不该用单药5-Fu进行辅助化疗?一拿到免疫组化结果,很多医生的表情是这样的:大家都知道,MSI-H/dMMR患者不能从单药5-Fu的***中获益。但问题是,面对由英文字母、数字、括号和加减号组成的免疫组化结果,如何确定是dMMR还是pMMR?到底怎样算H-MSI,怎样算L-MSI,怎样又算MS-S?下面我们就来解决这个问题。MMR基因是DNA错配修复基因,它的表达缺失可引起DNA复制过程中错配的累积,导致微卫星不稳定(MSI)的发生,约15%的结直肠ai是经由MSI途径引发的。迈杰转化医学病理检测平台配备有Roche/Leica/Dako等多种全自动检测仪器,有病理医生进行精确的判读。陕西dMMR抗体检测试剂郑重承诺
【迈杰转化医学】开发的dMMR抗体检测试剂,检测费用低,技术成熟,临床易开展。山东作用dMMR抗体检测试剂推荐咨询
发明人还提供上述任一所述的抗msh6蛋白单克隆抗体,在msh6蛋白免疫检测中的用途。进一步地,所述免疫检测包括免疫组织化学法,免疫印迹法和酶联免疫法。区别于现有技术,上述技术方案依据msh6蛋白、抗原性、组成氨基酸的亲疏水性以及二级结构,选择msh6蛋白第1-100位氨基酸序列与gst蛋白融合表达,其dna编码序列为seqid**,用大肠杆菌进行表达,得到免疫原。对小鼠进行免疫,经细胞融合、筛选和亚克隆,获得高效分泌抗msh6蛋白单克隆抗体的单克隆细胞系abm58060-20a2-pu,以及由该细胞系所分泌的抗msh6蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性,可以特异性识别表达msh6蛋白的细胞,适用于免疫学检测,特别是免疫组化检测。化染色结果图(左为abm58060-20a2-pu分泌的msh6,右为市售msh6)。具体实施方式实施例1重组msh6蛋白片段的制备一、抗原片段选择依据uniprot中登录号为p52701的蛋白质序列进行序列和二级结构分析,全长为1360个氨基酸长度的msh6蛋白含有muts超家族区域,其分子量约为152kda左右,依据通过在线服务器测的蛋白的二级结构(secondarystructure)和表面可及性(surfaceaccessibility)参数,并通过对其抗原性指数(jamesonba,:(1):181-6.)的分析结果。山东作用dMMR抗体检测试剂推荐咨询
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