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构建动物细胞培养室和植物细胞培养实验室(一)
细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。H前,**净工作台的广泛使用,很大程度上方便了组织细胞培养工作,并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。
细胞培养实验室应能进行大方面的工作:无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒火菌处理、储藏。
因此,无论是动物细胞培养室还是植物细胞培养实验室,必定有一下儿种房间。
1.涤问:根据工作量的大小决定其大小。在实验室的一侧设置的洗涤水槽,用来清洗玻璃器皿。实验台还应配置水槽,用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大,可以购置一台洗瓶机。准备洗液缸,用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。地面应耐湿并排水良好。
2.培养基配制间:配备的主要仪器设备有:冰箱、天平、微波炉、pH 计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、简、容量瓶、储藏瓶等。
3.滑毒间:配备实验台、高压火菌锅、排风火火设备、过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的手提式简压灭菌锅,较大的实验室可选用立式向动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭饱锅。如果没有条件的话,可以将上述工作间合并成一个准备间,要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风,地面要便于清洁、防滑。
4.无菌操作室:无菌操作室主要川于实验材料的接种操作,所以又叫接种室。通常由里外两间组成,外间是缓冲间,用于准备工作,还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲问闪应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修,工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。室内应配有**净工作台,紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。
5.培养室。
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11.培养用器皿:
(1)培养器皿:供细胞接种、生长等川的器皿,可由透明度好、无毒的小性硬质玻璃或无毒而透明光滑的特制塑料制成。
(a)玻璃培养器皿的优点是多数细胞均可生长,易于清洗、消毒,可反复使用,并且透明而便于观察;缺点是易碎,清洗时费人力。
(b)塑料制培养器皿的优点是一次性使用,厂家己消毒灭菌密封包装,打开即可用于细胞培养操作。
常用的培养器皿:
培养瓶:巾玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞,胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容 U(ml)表示,如 250ml、100ml、 25ml等;进口培养瓶则多以底而积(cm2)表示。
培养皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常川的培养皿规格有 10cm、9cm、6cm、3.5cm 等。
多孔培养板:为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂,可同时测试大呈样本,易于进行无饱操作。培养板分为各种规格,常用的规格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
各种单层牛.长的细胞在培养器皿中长满时可获得的细胞数,主要是取决于器皿的底表妞积和细胞体积的大小。常用培养器皿及可获得的细胞数(以 Hela 细胞为例)。
(2)培养操作有关的器皿:
a.贮液瓶:主要用于存放或配制各种培养川液体如培养液、血清及试剂等。贮液瓶分力各种不同规格,如 1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、 5ml 等。
b.吸管:主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体,常用的有1ml、2m1、5ml、10ml 等规格。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管,除可以作吸取、转移液体外,弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。
c.加样器(移液器):用于吸收、移动液体或滴加样本。可根据需要调节量的大小,吸量准确、方便。尤以微量加样器,可保证实验样品(或试剂)含量,重复性良好。n前,可高温消毒的,多通道的各类移液器可供使用者选择,能确保加样准确、快速、方便并且达到无菌要求。
(3)其他用品:尚有收集细胞用的离心管,放置试剂或临时插置吸管用的,装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器,用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽,套于吸管**部的橡胶吸头,封W各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不同规格的器、烧杯和:U:筒以及漏斗,**净工作合使用的酒精灯,供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。
m.器械:主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。
(1)常用的有:手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪(弯剪及直剪),川于解剖动物、分离及切剪组织,制备原代培养的材料;虹膜小剪(弯剪或直剪),用于将组织材料剪成小块;血管钳及组织镊、镊(弯、直),用于持取无菌物品(如小盖玻片)夹持组织等;口腔科探针或代川品,川以放置原代培养之组织小块。
(2)设备:细胞培养实验室除了应配备上述的常川基本设备以外,如有条件,可添
置一些或的设备仪器,以使较行效、较、较深入地进行实验室工作。
例如:
1.酶联*检测仪,可用于进行*学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。
2.温冰箱(-85℃) 便于储存某些试剂及标本。
3.旋转培养器 用丁某些细胞或需要收获大量细胞的培养。
4.荧光显微镜 进行荧光染色样来的观察。
5.流式细胞仪 可较及快速检测细胞。
6.用丁检测细胞培养条件的各种仪器,例如为快速分析细胞培养基中主要或关键营养成分、代谢产物及气体含M设计的多功能细胞培养分析仪、手提式浓度测定仪等。
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生物动物实验室消防系统
1.在生物安全实验室中引起火灾的通常原因包括:**负荷用电;电器保养不良,例如电缆的绝缘层破旧或损坏;供气管或电线过长;仪器设备在不使用时末关闭电源;使用不是专为实验室环境设计的仪器设备;明火;供气管老化锈蚀;易燃、易爆品理、保存不当;不相容化学品没有正确隔离;在易燃物品和蒸气附近有能产生火花的设备;通风系统不当或不充分。
2. 、生物安全实验室的消防原则是应先保证人员能尽快脱离危险,现场火灾必须能从外部进行控制,并使火灾不能蔓延。
3.灭火系统的介质包括水、水雾、气体以及泡沫。在具有高防护等级的场合,需要仔细考虑其使用情况,确保不影响人员安全、房间气压、消防排水的收集和处理等情况,防止次生灾害的产生。国外一些大动物生物安全实验室建筑物内,没有安装水或气体自动灭火系统,而是依赖传感和报警设备,以及手提式*,对火灾进行探测和控制。这种方法节省了开支,避免了水流造成的污染、使泄漏的可能降低到小。
4.在我国《生物安全实验室建筑技术规范)G346-2011中,关于生物安全实验室的消防作了如下要求。
(1)生物安全实验室的设计应符合G016《建筑设计规范》和C140《建筑*配置设计规范)中的有关规定。
(2)和生物安全实验室不应设置自动喷水灭火系统和机械排烟系统,但应根据需要采取其他灭火措施、如*等。
对于生物安全实验室的消防而言,应该建立“以防为主”的观念,防消结合。由地方消防队协助对实验室成员进行火灾发生时的应急行动和如何使用消防器材等方面的消防培训。在每个房间、走廊以及过道中应设置显著的火警标志、说明以及紧急通道标志。手提式*应放置在实验室明显且方便取用的位置,对于生物安全实验室*的选用,特别需要注意的是,不宜选用干粉类*,否则会对实验室的HEPA过滤器产生不良影响。
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动物实验室饲养防护区
饲养防护区设施基本的形态是由、走廊(或通道)、功能间和出口组成。走廊是连接各功能区的纽带,各种通道发挥快捷、隔离、消毒等作用。实验动物设施的特点是不相容的因素多,需要利用走廊和通道对不相容的因素作合理的安排。走廊的形式包括双走廊、单走廊、U型走廊、环廊等。设施内部的安排应根据工作流程和利于控制风险的原则确定,此外,还要考虑工程可行性和日常维护的方便性,可以组成相对立的单元。
深圳市中净环球净化科技有限公司是一家专业从事洁净室系统设计、施工及洁净室设备生产、销售,并提供专业化配套服务的高科技企业,公司始终秉承“以人才为基础,让科技服务于客户,为社会发展做贡献”经营理念,全心全意的为客户创造较优质产品,提供满意的服务。公司自成立以来,凭借自主创新的精神,开拓进取的科学管理,立志发展成为全国较具竞争力的行业**企业之一。(提供净化工程、净化产品、节能环保、LED车间、SMT车间、食品化妆品车间咨询、设计、施工)
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中净环球净化科技秉承“建*洁净室,创***品牌”的企业目标,倡导“务实、认真、敬业、创新”的****观,致力于**产品的研发和生产,提供优质的品牌产品与服务,净化世界各地生产者的生产环境,不断提升公司的利润与**,促进员工、股东与社会的共同繁荣。