惠州1000级 动物细胞gmp生产车间净化工程

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细胞培养实验室构建方案
(一)细胞培养实验室的设置
细胞培养实验室与其他一般实验室的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
细胞培养实验室应分为以下几个区：无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。
1.无菌操作区
(1)无菌操作室：无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，尽量能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰，一般地理位置在部分。
理想的无菌操作室应划为三部分：
a)较衣室---供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b)缓冲间---位于较衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境，同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。
c)无菌操作间---于无菌操作、细胞培养。其大小要适当，且其**部不宜过高(不**过2.5m)以保证紫外线的有效灭菌效果；墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。
(2)净化工作台：操作简单，安装方便，占用空间小且净化效果很好。一般培养室使用的净化工作台主要有两种： a) 侧流式或称垂直式b)外流式或称水平层流式。
净化工作台工作原理(大致相同) ---通常是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
净化工作台应用注意：
(1)净化工作台应安装在隔离好的无菌间或清洁无尘的房间内，以免尘土过多易使过滤器阻塞，降低净化效果，缩短其使用寿命。
(2)新安装的或长期未使用的工作台，工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作，然后再采用药物灭菌法或紫外线灭菌进行灭菌处理。
(3)使用净化工作台前，应先用75%酒精擦洗台面，并提前以紫外线灭菌灯照射30~50min处理净化工作区内积存的微生物。关闭灭菌灯后应启动风机使之运转两分钟后再进行培养操作。
(4)净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流流型不受干扰。
(5)注意净化区内气流的变化，一旦感到气流变弱，如酒精灯火焰不动，加大电机电压仍未见情况改变则说明滤器已被阻塞，应及时更换。一般情况下，过滤器三年更换一次。更换高过滤器应请人员操作，以保持密封良好。粗过滤器中的过滤布(无纺布)应定期清洗更换，时间应根据工作环境洁净程度而定，通常间隔3-6个月进行一次。
(6)净化工作台使用完毕应及时清理工作台面上的物品并用酒精擦洗台面使之始终保持洁净。
(7)净化工作台应定期进行功能测试，检查净化工作台各项工作指标是否达到要求，例如进行无菌试验，定期检查台面空气的洁净度是否达标。
**净工作台的无菌程度检查，**净工作台在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90mm平皿，在**净工作台内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将平皿半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板，在30~35℃预培养48小时，无菌后将平板3个，以无菌方式带入**净工作台内左、中、右各放一个；打开平皿盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将平皿盖盖好，置30~35℃培养48小时，取出检查，100 级清洁度要求： 3个平皿上生长的菌落数平均不得**过1个。
**净工作台应定期请有关部门检查其洁净度，应达到100级(一般用尘埃粒子计数仪)检测尘埃粒径≤5衸的粒数不得**过3.5个/升；空气流量应控制在0.75~ 1. 0m3/s；菌落数平均<1个，可根据无菌状况必要时置换过滤器。
2.孵育区
本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。
3.制备区
在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
4.储藏区
主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境也需要清洁无尘。
5.清洗和消毒灭菌区
清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开，主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。

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实验室管理使用规程
1目的建立实验室管理使用规程，保证操作者正确使用。
2范围适用于实验室操作。
3责任者操作人员、实验室管理人员。
4内容
4.1实验室应严禁放置杂物,无关人员严禁入内。
4.2实验室应严格保持整洁，防止污染，定期消毒。实验室应每次使用前后用0.1%新洁尔灭溶液擦拭工作台面及可能污染的死角，湿拖地面，每周湿擦墙面及天花板。定期清洁空气净化器，做好消毒记录。无菌衣每周送供应室消毒。
4.3实验人员用肥皂洗手后进入缓冲间换拖鞋，用75%棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。进行无菌操作时，衣帽穿戴要整洁。帽子要将全部头发遮盖，口罩须遮住口鼻，并修剪指甲，洗手。
4.4将所需物品剥去牛皮纸及外包装，从传递窗移入操作间。所有进出实验室的物品需通过传递窗通道，并且需经过紫外线消毒或75%酒精消毒。
4.5**净工作台使用前开启紫外灯照射30分钟，使用时打开吹风净化工作台，操作完毕及时清理消毒。
4.6取无菌物品时，必须用无菌钳(镊）,镊子剪刀等在每次使用前后，必须通过火焰灭菌冷却后方可使用。未经消毒的物品不可触及无菌物或跨越无菌区。器如需回抽时，应对着火焰吸入无菌空气。
4.7实验过程严格按照无菌操作规程操作，进行无菌操作时如器械、用物疑有污染或已被污染，即不可使用，应更换或重新灭菌。所有消毒火菌物品必须及时标明打开时间，并在规定时限内使用。实验完毕，整理检品及各种用具并清洁工作台面。
4.8细胞培养箱、离心机等实验仪器根据各自要求定期消毒。新配培养液等试剂送检无菌后使用。
4.9各种消毒灭菌剂根据其性能及产品说明与要求配置，并按要求定时测试浓度,保证消毒灭菌效果。实验室定期进行洁净度测试检查沉降菌（在室内打开血琼脂平板30分钟，经37C培养48h),100级平均菌落数不得过1个/皿，如**过应进行清洁消毒。

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细胞实验室*仪器：
一、CO2培养箱
CO2培养箱是细胞培养的*仪器，它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、湿度、酸碱度、O2浓度等。细胞在体外培养时很容易受到各种、微生物的感染，因此，CO2 培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要。Thermo系列CO2培养箱具有的灭菌和抑菌功能。Hepa 过滤器，箱体内达到100级空气质量;不锈钢抛光内胆，有效抑制微生物附着;
二、纯水系统
细胞培养过程中，内对细胞的生长有很大的影响，水中的内直接参与细胞凋亡，血清中内含量越低，对细胞毒性越小，越利于细胞的生长和传代；内含量过高，会直接导致细胞提前老化。而常规的普通蒸馏水在玻璃器皿中按标准方法蒸馏二次得到的双蒸水ddH20是不能满足要求的，细胞培养用水一般要求双蒸水(0. 8MQ以上)，因此，必须配置正式的水纯化系统，采用无内纯水配制所有培养用试剂。
三、**净工作台/生物安全柜
细胞培养对无菌环境要求很高，与CO2培养箱一样，在细胞操作时，一般需要在100级空气质量条件下进行，因此**净工作台或生物安全柜就必须配备。
四、液氮罐
为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，胚胎ESC，诱导多能IPS，间充质MSCs，要将细胞冻存。冻存的温度一般为液 氮温度-196℃，因此，需要液氮罐。在此环境中，一般细胞可以保存十年具有活性，同时液氮罐必需配备报警器，液氮量减少时及时添补液氮量。
五、温冰箱
细胞的冻存过程需要一系列程序降温， 一般4°C 下存放30 min，转放-20°C 1hour，再转入-70至80°C过夜，之后才可以转移到液氮内(-196°C)，这时就必须配备一台-86C温冰箱。一般温冰箱保存细胞可达数月，对于不需要长期冻存的细胞，可暂时放于温冰箱保存。
六、恒温水浴
从液氮或温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于37°C水浴中快速复苏之后才传代培养，因此，恒温水浴也是细胞实验室*仪器，复苏过程中要注意水浴时间1-2min，随时观察。
七、离心机
细胞培养需要离心收集传代细胞，所以需要配置低速的常温离心机，对于后期细胞内容物的分离则需要高速冷冻离心机。
八、移液器和细胞培养的大量耗材
细胞实验中有大量频繁的移液操作，因此各种微量移液器、瓶口分配器、移液管控制器是**的。各类细胞培养板、细胞培养瓶、移液管等耗材较是不可或缺的，而且一次性，用量大。
除上述仪器外，高压灭菌锅、倒置显微镜也是细胞培养的*仪器。
常用的培养器皿：
培养瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞，胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容量(ml)表示，如250ml、100ml、 25ml 等；进口培养瓶则多以底面积(cm2) 表示。
培养皿:由玻璃或塑料制成，供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常用的培养皿规格有10cm、9cm、6cm、 3. 5cm等。
多孔培养板：为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂，可同时测试大量样本，易于进行无菌操作。培养板分为各种规格，常用的规格有: 96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

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  实验室平面布局是实验室设计的基础，只有按照功能分区和工作流程的需求做好相应的平面布局规划才能确保后续的水、电、风等的设计，平面布局设计阶段应尽可能地详细考虑工作和发展的需求，合理配置空间，尽量优化整合。除了布局的优化和仪器设备的摆放位置的设计外，还应充分考虑到人员流动与物品流动的方向是否符合工作要求。例如，为了避免实验人员频繁跑动，前处理室应该和仪器室在同一楼层;气瓶室应和气相色谱仪、气质联用仪等仪器在同一楼层;避免楼层过多，每一层都要设置洗涤室、样品室以充分利用空间;生物安全室应合理布局洁净区、半洁净区、污染区，以避免交叉污染。
  实验室设备清单：
  低温冰箱：用于科研研究、用品的保存、生物制品、远洋制品、电子元件、化工材料等材料的低温实验及储存。
  冻存盒：细胞冻存用，里面添加异丙醇。
  液氮罐：一般可分为液氮储存罐、液氮运输罐两种，大口为细胞冻存、存储用，密闭性好，须有配套提示不锈钢，细胞冻存盒，小口为购买更换液氮运输用。
  超声波粉碎仪：将电能通过换能器转换为声能，这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡，这些小气泡迅速炸裂，从而起到破碎细胞等物质的作用。
  离心机：细胞间收集细胞用。
  磁力搅拌器：用于加热或加热搅拌同时进行，适用于粘稠度不是很大的液体或者固液混合物的搅拌溶解。
  脱色摇床：洗膜用，摇摆式混匀仪，抗体孵育用。
  恒温摇床：又称控温摇床、振荡培养摇床、恒温振荡器、恒温摇培养箱，主要用于微生物或细胞的培养和一些生理生化反应等。
  **净工作台：提供局部无尘无菌工作环境的单向流空气净化设备，适用于医药卫生、生物制药、食品、科学实验、光学、电子、无菌室实验、无菌微生物检验、植物组培接种等需要局部洁净无菌工作环境的科研和生产。
  生物安全柜：是为操作原代培养物、诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计。
  通风柜：可以减少实验者和有害气体接触，防止实验操作中产生的有害气体、臭气、湿气及腐蚀性物质对实验者造成伤害。
  二氧化碳培养箱：通过箱体模拟组织内环境对细胞组织培养的一种装置，用于细胞、组织培养和某些微生物的培养，应用于细胞动力学研究、哺乳动物细胞分泌物的收集、抗原的研究和生产、培养杂交细胞生产抗体、体外受精、、组织工程、药物筛选等研究领域。
  鼓风干燥箱:干燥用，需可定时，有安全警报。
  低温恒温槽：保持低温，分子生物使用。
  微波炉：DNA琼脂糖凝胶制备用。
  水浴锅：细胞间复苏细胞用。
  PCR仪：利用DNA聚合酶对特定基因做体外内的大量合成，基本上是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制，普通PCR仪可做梯度和降落PCR，荧光定量PCR仪定量分析。
  PH计：酸碱度调节用，需稳定灵敏度高，操作简单，使用时不用校准可直接使用。
  纯水机与**纯水机：制备纯水
  显微镜：普通倒置显微镜可做细胞间普通细胞观察用，倒置荧光显微镜可做普通细胞观察和荧光分析，带成像系统，相机和成像系统需灵敏度高，需配置电脑。
  电光学发光仪：用于检测人体的仪器。
  天平：微量称量用，称量质量稍重物品和50ML离心管配平用。
  细胞计数仪：细胞计数用。

深圳市中净环球净化科技有限公司是一家专业从事洁净室系统设计、施工及洁净室设备生产、销售，并提供专业化配套服务的高科技企业，公司始终秉承“以人才为基础，让科技服务于客户，为社会发展做贡献”经营理念，全心全意的为客户创造较优质产品，提供满意的服务。公司自成立以来，凭借自主创新的精神，开拓进取的科学管理，立志发展成为全国较具竞争力的行业**企业之一。（提供净化工程、净化产品、节能环保、LED车间、SMT车间、食品化妆品车间咨询、设计、施工）        
    中净环球净化科技(ccg-sz)提供微电子、LCD、光电、光伏、精密机械、制药、生物安全 实验室、医院手术室、食品化妆品、钢结构等领域工程设计、制造、安装调试、检测综合性成套服务。以洁净技术为**，在ISO9001**质量体系认证、ISO14001际环境管理体系下进行30万-10级洁净系统整体规划设计、安装.公司的产品有：风淋室、货淋室、传递窗、洁净工作台、初中效过滤、高效送风口、洁净棚、自净器、FFU净化单元、洁净服、洁净耗材。    
    中净环球净化科技秉承“建*洁净室,创***品牌”的企业目标，倡导“务实、认真、敬业、创新”的****观，致力于**产品的研发和生产，提供优质的品牌产品与服务，净化世界各地生产者的生产环境，不断提升公司的利润与**，促进员工、股东与社会的共同繁荣。