牛羊口蹄疫病毒A/O型抗体检测试剂盒的检测原理?牛羊口蹄疫病毒A/O型抗体检测试剂盒由预包被口蹄疫病毒A/O型抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联*法(ELISA)原理检测牛羊血清样本中口蹄疫病毒A/O型抗体。实验时在酶标板中加入待检样本和抗体工作液,经温育后洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,若样品中含有口蹄疫病毒A/O型抗体则将阻断抗体工作液与酶标板上抗原结合,从而使后续反应不出现显色;反之则出现显色;显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值, 即可知样品是否含有口蹄疫病毒A/O型抗体 。
牛羊口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒检验方法
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl;样品孔每孔先加入45μl工作洗涤液,再加入5μl血清样本。
4.每孔加抗体工作液50μl,混匀,盖好盖板膜,置37℃(推荐水浴)避光反应30分钟。
5.甩去孔内液体,每孔加350μl工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,***一次拍干。
6.每孔加酶标记物100μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。7.洗涤,同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,盖好盖板膜,置37℃避光反应15分钟。
9.每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。
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