K562/ADRK562耐阿霉素细胞株的培养说明

　　一、细胞简介：

　　细胞名称：K562/ADRK562耐阿霉素细胞株（STR鉴定）

　　K562/ADR为由K562细胞构建的耐ADR药物细胞株。

　　二、细胞特性

　　1）来源：人慢性髓系白血病细胞耐药筛选

　　2）形态：淋巴母细胞样；圆形，悬浮生长

　　3）含量：>1×106细胞数

　　4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

　　5）用途：仅供科研使用。

　　三、细胞培养试剂的配制

　　1）ADR药物的配制及保存

　　建议将ADR药物配制成1mg/mL的母液，即使用10mLPBS溶液溶解10mgADR药物，使其*溶解后，使用0.22um滤器过滤除菌。

　　注意：可根据用量配置药物，并将药物分装保存，避免反复冻融导致药物失效。溶解后的ADR，4℃保存1周，-20℃保存1个月，-80℃保存6个月。

　　2）冻存液的配制

　　90%**胎牛血清+10%DMSO，现用现配。（冻存液中不含药物）

　　3）*培养基的配制

　　细胞培养条件

　　气相：空气，95%；，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%~80%。

　　四、细胞处理

　　1）冻存细胞的复苏

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中*摇晃解冻，加入到含4~6mL*培养基的离心管中混合均匀，1000rpm/min离心3~5min，弃去上清液。加入1mL*培养基重悬细胞后，均匀铺于含6~8mL*培养基的培养瓶（或皿）中，置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　注意：①细胞复苏过程中，不可使用含有药物的培养基。须在细胞密度达约8×105个/mL时，方可添加500ng/mLADR药物；若细胞生长状态较为缓慢，可适当降低ADR的浓度（**降低一半药物浓度），或使用不含ADR的*培养基培养至细胞生长状态较好时，再更换为所需的ADR浓度。

　　②建议复苏细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸，造成人员伤害。

　　2）细胞传代（建议以同等底面积的培养瓶/皿按照1：2比例传代）

　　悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加*培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL，可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

　　注意：细胞传代1~2次后仍能保持增殖，即可提高药物浓度至1ug/mL继续培养；若此过程中细胞停止增殖，且状态较差，则需降低药物浓度（**降低一半药物浓度）或使用不含药物的*培养基培养，至细胞密度约8×105个/mL，且生长状态较好时，再更换为所需的ADR药物浓度。

　　3）细胞冻存

　　①细胞冻存时，收集细胞悬液到离心管中，1000rpm，离心5min，弃去上清。

　　②细胞计数后，加入配制好的细胞冻存液，重悬细胞，按照1×106~1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

　　注意：细胞冻存过程中，不可添加药物。

　　③将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入容器中储存。同时记录好冻存管在容器中的位置以便后续查阅和使用。