层析柱进气泡怎么办?
层析柱进气泡怎么办?
空气进入,如缓冲液走空,连接进入系统过程中
用纯水反向冲洗,如果有柱位阀可直接切换流向,没有的话可将柱子反接
对于大多数层析柱来说可用乙醇冲洗,以提高排气效率
缓冲液中有气泡
上柱前将缓冲液脱气
在缓冲液入口使用空气感应器
温度影响,如在冷室操作后马上在室温操作,或低温缓冲液直接在室温使用
缓冲液在使用前达到热平衡
层析柱装柱、使用及相关注意事项关于层析柱装柱、使用及相关注意事项
(1)、装柱前要仔细看填料的使用说明书,每种填料都有自己的特性,以及特殊的装柱方法,针对不同的空柱,也要注意方法可能不同;这一点非常重要:装柱包括以后使用中不允许柱内进入气泡(bubble free),柱头事先也要排除气泡。
(2)、填料要加水搅拌成均匀悬液,悬液浓度依填料而不同,一般70-85%,迅速倒入空柱内,大孔树脂柱生产厂家,或吸或压,流速和具体步骤看说明书。
(3)、所有柱子尽量做到填料均匀,尤其是用于凝胶层析的柱子。装柱完成后,大孔树脂柱,可用柱效测定的方法检查装填效果。一个装填合格的柱子的理论塔板高度应是填料平均粒径的2-4 倍,在此范围内越小越好。
(4)、选择合适的泵,**是流速满足要求,脉冲尽量小。柱塞泵。
(5)、准备上柱的液体应进行过滤,至少是0.45micrometre。
(6)、关于纯化,**要考虑的是你的目标:纯度、数量、速度、收率等等,再根据样品的具体情况,大孔树脂柱多少钱,尤其是目标蛋白的性质,确定纯化策略。通常三步曲:capture、purification、polishing。*步先从大量或复杂样品中将目标蛋白%26ldquo;抓出%26rdquo;,与主要杂质分离;再用高选择性的层析去除绝大部分杂质;后精细纯化,提供纯度至设定目标。到实际工作中,不要死靠三步,也许一步也许四步或更多,具体情况具体分析。所谓%26ldquo;三步%26rdquo;只是一种思路而已。
(7)、至于测序,我想大概不到1mg 应该足够了。
层析柱上柱子后压力大怎么办
先试试空白运行,就是不经过柱子光走系统,看看压力是多少,检查是否系统压力过大。
如果系统压力正常,则检查溶液是否澄清,有无沉淀或泛白。
如果溶液没有问题,检查柱头是否堵塞,柱头前的滤膜是否需要清洗。
然后检查下填料是否完整,有无被压碎的填料或者有无杂志吸附在填料上,参照说明书清洗再生下填料。
层析柱压力过大容易压碎填料,需要及时暂停减小压力后继续上柱。
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