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培养

1、根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养两大类。

好氧培养：也称“好气培养”。就是说这种微生物在培养时，需要有氧气加入，否则就不能生长良好。在实验室中，斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌的空气。三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡，使外界的空气源源不断地进入瓶中。

厌氧培养：也称“厌气培养”。这类微生物在培养时，不需要氧气参加。在厌氧微生物的培养过程中，zui重要的一点就是要除去培养基中的氧气。

2、根据培养基的物理状态，可分为固体培养和液体培养两大类。

固质培养：是将jun种接至疏松而富有营养的固体培养基中，微生物检测中心，在合适的条件下进行微生物培养的方法。

液体培养：在实验中，通过液体培养可以使微生物*繁殖，获得大量的培养物，在一定条件下，还是微生物选择增菌的有效方法。

抑菌效力-菌液制备

取大肠埃希菌、金黄色putao球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液制成 适宜浓度的菌悬液。取表 2 黑曲霉的新鲜培养物加入 3～5ml 含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯80 的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 2～8℃，可在24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2～8℃，在验证过的贮存期内使用。

1.血细胞计数法

将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上，在显微镜下计算4~5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再以此为依据，估算总菌数。

①此法的缺点是不能区分死菌和活菌。

②对压在小方格界线上的细菌，应当取平均值计数。

③此法可用于测定培养液中酵母jun种群数量的变化

2.稀释涂布平板法

原理:每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

①这一方法常用来统计样品中活菌的数目

②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个活多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定。但不适于测定样品中丝状体微生物，例如放线jun或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。

④此法若不培养成菌落，可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上，经固定染色后在显微镜下计数，这样又称涂片计数法。染色可用台盼蓝，台盼蓝能使死细胞染成蓝色，可分别计数死细胞和huo细胞。

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