蛋白结晶板作用
蛋白质作为生命活动的载体,研究其分子结构及发挥生物活性的机制具有重要意义.结晶作为研究生物大分子结构及功能的重要手段,近年来发展迅速.介绍影响蛋白质结晶的因素、目前常用的蛋白质结晶方法以及提高蛋白质结晶条件筛选率和衍射质量的新技术和新策略,这对蛋白质结晶的研究有一定的推动作用。
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蛋白质结晶涉及四个重要步骤
1. 蛋白质纯度的确定。如果不够非常纯,必须要进一步纯化。
2. 蛋白质溶解于合适的溶剂中,从中它能通过一种盐或有机化合物而析出。溶剂通常是水-缓冲剂溶液,有时加,如2--2,4-(MPD)。正常情况下,沉淀剂也被加入,但是浓度不高于使沉淀产生。对于不溶于水-缓冲剂或水-的膜蛋白,还需要加入去污剂。
3. 使溶液过饱和。在这一步中,小聚集体形成,它是晶体生长所需的核。对小分子的结晶来说,相比于蛋白质更为人熟知,晶核的自发形成需要提供表面张力能。一旦这个能障被突破了,晶体开始生长。能障在高水平的过饱和度时很容易克服。因此,在高过饱和度时,晶核更易自发形成。晶核的形成可作为一个过饱和度和其他参数的函数通过多种方法来研究,包括光散射、荧光去极化及电子显微镜。
4. 一旦晶核形成,晶体生长正式开始。对低分子量的化合物而言,新分子会逐步结合到正在生长的晶体表面。这是由于这些位置的结合能比较大,相对于分子结合到平滑的表面。这些步骤要么由晶系缺陷造成,要么发生在表面随机形成的晶核。
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蛋白质晶体板
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