干热灭菌和湿热灭菌主要常用的方法干热灭菌法是指在干燥环境(如火焰或干热空气)进行灭菌的技术。一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法。本法适用于干燥粉末、凡士林、油脂的灭菌,也适用于玻璃器皿(如、平皿、吸管、器)和金属器具(如测定效价的钢管、针头、摄子、剪刀等)的灭菌。湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法,由于蒸汽潜热大,穿透力强,容易使蛋白质变性或凝固,所以该法的灭菌效率比干热灭菌法高,是药物制剂生产过程中常用的灭菌方法。湿热灭菌法可分为:煮沸灭菌法、巴氏消毒法、高压蒸汽灭菌法、流通蒸汽灭菌法、和间歇蒸汽灭菌法。药品、药品的溶液、玻璃器械、培养基、无菌衣、敷料以及其他遇高温与湿热不发生变化或损坏的物质,均可用本法灭菌。
为使箱内各点的温度均匀,除依靠强制的循环空气对流传热以外,还在箱体左右两侧设有可调节的分风装置,使箱内上下各点的温度较趋一致,物料干燥均匀。
干热灭菌柜的应用领域干热灭菌柜适用于制药化工食品行业的西林瓶、安瓿瓶、铝瓶、金属及玻璃器皿件灭菌去热原和固体物料干热灭菌。下面详细说下干热灭菌柜灭菌试验。
(1) 根据试验要求,制备枯草黑色变种芽孢悬液和芽孢样片。
(2) 每次试验取 2 个菌片为一组,平放于无菌平皿内,勿重叠。加盖,分置于灭菌柜的各层,内、中、外不同部位。试验时,干热灭菌柜内除菌片样本外,还应满载以模拟的常规处理物品。
(3) 关闭柜门,开启电源,按灭菌柜设计程序进行灭菌。灭菌完毕,取出平皿,将菌片取出接种于含 5.0ML 营养肉汤培养基中,置 37℃ 培养箱内作定性培养。72 H 后观察结果。肉汤管混浊者表示有菌生长, 判为阳性; 肉汤管澄清者表示无菌生长, 继续培养至* 7 D, 若仍无菌生长,判为阴性。对难以判定的肉汤管,取其中 0.2ML 悬液接种营养琼脂平板,用灭菌 L 棒涂布均匀,置 37℃ 培养箱中培养。48 H 后涂片染色,在显微镜下观察菌落形态,或进一步做其他试验,以判断生长者是否为试验菌。若有非试验菌污染,应查找原因重新进行试验。
(4) 测试中,应同时设立定性和定量阳性对照组(菌片对照)与阴性对照组(培养基对照)。
(5) 定量阳性对照组,以同批试验用菌片放在室温下,待试验组灭菌接种后,立即将该菌片 2 片分别移入含 5.0ML PBS中,各振荡 80次洗涤。进行活菌培养计数。
(6) 定性阳性对照组,以同批试验用菌片放在室温下,待试验组灭菌接种后,立即将试验菌片 2 片,分别接种于 5.0ML 营养肉汤培养基,放入培养箱中作定性培养,观察有生长情况。
(7) 阴性对照组,以空白样片 2 片,分别接种于 5.0ML 营养肉汤培养基,同时将未接种过的营养肉汤培养基放入培养箱中作定性培养,观察有无生长。
(8) 试验重复 5 次。
开机时,为了求得加速升温时间,将加热开关打**温,两组加热器同时加热,达到恒温状态后,可将加热开关打至低温,只留一组加热器工作节约电耗。
7、取放试物时,勿撞击伸入工作室内的传感器,以防损及传感器的测温头子导致控制失灵。
8、开机前将箱**排气阀旋开约10mm左右,以利箱内空气变换对流,并将潮气和废气排出。
9、欲观察工作室内试品情况,可开启外门,或从玻璃门向内窥视,但外门不常开为宜,以免热量外泄,且当温度升到300度左右时,开启箱门可能会使玻璃急骤冷却而破裂。
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