操作步骤:
1.成年鼠肝匀浆2000xg(约4000rpm) 离心15分,4℃(6×50ml高速转头)
2.沉淀用1mM NaHCO3 稀释再在4000rpm离心15分,4℃
3.沉淀按湿重1g/ml NaHCO3 稀释后配成68%蔗糖液,置于离心管下部,上部用42%蔗糖液
4.6×50ml高速转头,42200xg(18000rpm),4℃离心90分钟,加速“5”减速“5”
5.离心后,粗制细胞膜在42%与68%蔗糖液之间形成
6.粗制细胞膜吸出后,用1mM NaHCO3 稀释后,再以2000xg(约4000rpm)4℃离心30分,重复二次
7.去除上清液沉淀,再用1mM NaHCO3 稀释,在50ml 离心管中,从底部依次向上铺设:68%蔗糖液(稀释样品配成)、48%蔗糖液、42%蔗糖液。
8.铺好后再次离心,6×50ml高速转头,18000rpm,4℃,90分钟,加速“5”减速“5”
9.离心结束后可以看出细胞膜分布在42%与48%蔗糖液之间
成果:阶梯形蔗糖梯度在50ml 离心管中用高速冷冻离心机分离亚细胞构造(膜、线粒体、溶酶体、高尔基复合体、微体等),由于开发了高强度的组培养管而变得较为可行。
连续离心转子(Continuous-Flow-Rotor):
主要用于悬浮介质中高速分离较小的颗粒物质,如在培养基中分离细胞,在运转过程中,悬浮样品以一定速度从转子体中心流入离心池,由于溶液中的组分轻重不同,在离心力场作用下,重粒子具有较大的惯性离心力、沉降快,当流速增大(降低)到一定值时,重粒子将留在离心池外缘底部,而介质将从出口流出并带走较轻的粒子,收集组分的方法是把组分冲洗出离心池或者留在转子体内,这种转子是利用离心淘析技术对整细胞或大的亚细胞粒子进行分离,在无菌和低温条件下,被分离的组分,能保持活性,回收率高等优点。如果液流方向与离心力方向相反,即降低了粒子运行速度,相当于增长了运行距离,从而提高了分辨能力。
区带转子(Zonal-Rotor):
主要用于大容量的密度梯度离心,当实验所需制备的样品量多,而甩平转子因受到量的限制时,采用区带离心是较好的。主要由带有四块叶片的转子体和密封系统组成,转子体和四块叶片将离心池分为四个扇形小室,阻止溶液在离心池中旋转,叶片上有径向导管,溶液通过导管从中心流向转子体外壁,装样和取样时应小心,装样一般在2500∽3000rpm运转中进行,首先将梯度液中较轻的部分通过密封管道泵入转子内,由于惯性力的存在,梯度液在转子外壁的垂直方向形成均匀的一层,再依次将密度较高的梯度液泵入,随着密度的增高和梯度液的不断泵入,密度较低的梯度液被推向中心,直到转子完全装满,然后通过密封组件中心输液管把待分离的样品(其密度与梯度液中轻的密度部分还低)加入,接着把密度较低的溶液注入,用以取代中心附近的样品,装完后,移去密封组件,盖上转子盖,在一定转速离心一定时间后,转速降至2500∽3000rpm,装上密封组件及输液管,通过泵入较密的液体到转子的液体由轻至重依次挤出。
立式高速大容量离心机
立式高速大容量离心机采用微机控制,可直接设定转速,自动计算RCF值。可直接设定RCF值,自动转换成转速;运行参数可自动记忆,运行中可修改参数。一般具有多种自定义程序存储功能;具有软刹车、转子号识别、**温、**速、不平衡和门盖安全保护功能,并在显示窗口显示故障信息和声音报警。
按转速的高低:可分为低速离心机、高速离心机及**高速离心机三种,一般10000转以下为低速离心机、10000转至30000转以上为高速离机,转速大于30000转的为**高速离心机(目前暂无国内企业涉足生产)。
盐城市安信实验仪器有限公司是生产、销售离心机的专业企业。公司不断引进国外**并与国内大专院校、科研单位合作,使产品技术紧跟世界**水平,现生产七大系列(实验离心机,小型离心机,低速离心机,冷冻离心机,台式离心机,高速离心机)50余种规格的离心机产品。公司对离心机产品的**技术进行了一系列的深入研究。如:转子**高速实验、**冷冻实验,转子光弹实验,电阻法应变测量试验、轴对称有限元法理论计算等,研制开发了变频电机驱动,微机程序控制等操作简便、安全可靠的新一代离心机。