11、医药
以药品检验和研发为主,净化实验室的比重在实验室当中占有重要比重。实验室应严格按照GMP相关规定来建设。
2)等密度离心法
某些密度梯度介质经过离心后会自身形成梯度,如Percoll则可迅速形成梯度,CsCl、Cs2SO4和三碘苯甲酰葡萄糖胺经长时间离心后也可产生稳定的梯度。需要离心分离的样品可和梯度介质先均匀混合,梯度介质由于离心力的作用逐渐形成管底部浓而管**稀的密度梯度,与此同时原来分布均匀的颗粒也发生重新分布。当管底介质的密度大于颗粒的密度即ρm>ρp时,颗粒上浮;当管**介质的密度小于颗粒的密度即ρp>ρm时,则颗粒沉降;后颗粒进入到一个它本身的密度位置即ρp=ρm,颗粒不再移动,形成稳定的区带。等密度离心法需时间较长,一般为十几小时至几十小时。
梯度材料的选择原则 ①对被分离的生物样品无作用,不会使生物样品失活;②在溶液中稳定,在离心作用下不会解离或聚合;③在使用的密度范围中,粘度低,渗透压小,离子强度及pH值变化小;④易与被分离的颗粒分开;⑤不会对离心机设备发生腐蚀作用;⑥便于浓度测定等等。这些原则当然比较理想,完全符合每种性能的梯度材料几乎是没有的。下面介绍几种基本上符合上述原则的梯度材料:
(1)糖类:蔗糖、甘油、聚蔗糖(ficoll)、右旋糖酐、糖原等。
(2)无机盐类:CsCl(氯化铯)、RbCl(氯化铷)、NaCl、KBr等。
(3)**碘化物:三磺苯甲酰葡萄糖胺(martizamide)等。
(4)硅溶胶:Ludox的各种类型,如Percoll。
梯度液的收集 离心后颗粒在梯度液中分层,小心取出离心管,防止振摇以避免分层的
颗粒混和。收集梯度液中颗粒的方法很多,有管底穿孔计滴法、插管虹吸计滴法,浓液**替法和注射器穿孔抽取法等。
2、沉降系数
1924年,Svedberg定义沉降系数为颗粒在单位离心力场作用下的沉降速度。即:
S=(dR/dt)/ω2R (4–11)
沉降系数的物理意义是颗粒在离心力作用下从静止状态到达极限速度所经过的时间。沉降系数的单位用svedberg表示,量纲为秒,1 svednerg=10-13秒,简称S。
将式4–10二边同除以ω2R,得到沉降系数的表示式:
S=(dR/dt)/ω2R=d2(Pp-Pm)/(18ηf/f0) (4–12)
从上式可知:在给定的介质中沉降系数的大小主要是由颗粒直径的平方和摩擦系数f/f0所决定。
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