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高效液相色谱
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用 [1] 。
中文名 高效液相色谱 外文名 High Performance Liquid Chromatography 又 称高压液相色谱 概念提出茨维特
目录
1 历史
2 特点
3 类型
4 结构
? 组成
? 技术动态
? 高压输液泵
? 色谱柱
? 进样器
? 馏分收集器
? 数据
5 分离原理
? 液-液分配
? 液—固
? 离子交换
? 离子对
? 离子
? 空间排阻
6 流程
7 相关术语
8 色谱柱
9 测定
? 综述
? 相对分子质量
? 溶解度
? 化学结构
10 设备
? 综述
? 高压泵
? 梯度洗脱
? 进样装置
? 色谱柱
? 检测器
11 正反色谱
12 实例
13 液相色谱理论
历史编辑
1903年俄国植物化学家茨维特（Tswett）首次提出“色谱法”（Chromatography）和“色谱图”（Chromatogram）的概念。茨维特使用色谱法 chromatography （来自希腊字， chroma 意思是颜色， graphy 意思是记录 - 直译为颜色记录）来描述他的彩色试验。（令人好奇的是, 俄罗斯名字茨维特意思是颜色。）他在论文中写到：
“（原文）一植物色素的溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样，称之为色谱图。”
1930年以后，相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术。
1952年，英国学者Martin和Synge 基于他们在分配色谱方面的研究工作，提出了关于气－液分配色谱的比较完整的理论和方法，把色谱技术向前推进了一大步，这是气相色谱在此后的十多年间发展十分迅速的原因。
1958年，基于Moore和Stein的工作，离子交换色谱的仪器化导致了氨基酸分析仪的出现，这是近代液相色谱的一个重要尝试，但分离效率尚不理想。
1960年中后期，气相色谱理论和实践发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱又开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。
1970年中期以后，微处理机技术用于液相色谱，进一步提高了仪器的自动化水平和分析精度。
1990年以后，生物工程和生命科学在国际和国内的迅速发展，为高效液相色谱技术提出了更多、更新的分离、纯化、制备的课题，如人类基因组计划，蛋白质组学有HPLC作预分离等。
特点编辑
高效液相色谱法有“四高一广”的特点：
高效液相色谱
高效液相色谱(2张)
①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。
③高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。
⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。
⑥柱子可反复使用：用一根柱子可分离不同化合物
⑦样品量少、容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。
此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显着地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。
类型编辑
1．吸附色谱法(Adsorption Chromatography)
2．分配色谱法(Partition Chromatography)
3．离子色谱法(Ion Chromatography)
4．分子排阻色谱法/凝胶色谱法(Size Exclusion Chromatography)
5．键合相色谱法（bonded-phase chromatography）
6．亲和色谱法(Affinity Chromatography)
结构编辑
组成
可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。
技术动态
液相色谱和质谱连接，可以增加额外的分析能力，能够准确鉴定和定量像细胞和组织裂解液，血液，血浆，尿液和口腔液等复杂样品基质中的微量化合物。高效液相色谱质谱系统（ABSciex Eksigent LC / MS和LC / MS / MS）提供了一些独特的优势，包括：
快速分析和流转所需的最少样品准备
高灵敏度并结合可分析多个化合物能力，甚至可以跨越化合物的种类
高精确度，高分辨率鉴定和量化目标分析物
高压输液泵
功能
驱动流动相和样品通过色谱分离柱和检测系统；
性能要求
流量稳定（±1)，耐高压(30～60Mpa)，耐各种流动相：例如：有机溶剂、水和缓冲液；
种类
往复泵和隔膜泵。
色谱柱
功能
分离样品中的各个物质；
尺寸
10～30cm长，2～5mm内径的内壁抛光的不锈钢管柱；
填料粒度
5 ～10μm ，高效微粒固定相；
进样器
功能
将待分析样品引入色谱系统；
种类
①注射器，10Mpa以下，1～10μm微量注射器进样
②停流进样
③阀进样，常用、较理想、体积可变，可固定
④自动进样器，有利于重复操作，实现自动化
检测器　
功能
将被分析组在柱流出液中浓度的变化转化为光学或电学信号；
分类
①示差折光化学检测器
②紫外吸收检测器
③紫外-可见分光光度检测器
④二极管阵列紫外检测器
⑤荧光检测器
⑥电化学检测器
馏分收集器
功能
如果所进行的色谱分离不是为了纯粹的色谱分析，而是为了做其它波谱鉴定，或获取少量试验样品的小型制备，馏分收集是必要的；
方法
①手工，少数几个馏分，手续麻烦，易出差错。
②馏分收集器收集，比较理想，微机控制操作准确。
数据
获取与处理功能
把检测器检测到的信号显示出来。

再生资源回收利用技术开发投入严重不足。由于资金投入少，技术开发能力弱，导致废旧物资加工处理工艺落后，技术及装备水平极低，一些与再生资源加工处理相伴的环境污染物未能妥善处理。即使是先进适用的技术，也由于缺少资金而难以推广应用。大部分再生资源的加工处理技术还十分落后，与资源综合利用和环境保护的要求差距甚远。

实验仪器，是指在没有现成的商品化仪器可供购买，或虽买得到但买不起的情况下，寻找相关材料自行研制和制作符合教学要求的实验仪器。其意义主要在于：①过渡性地解决仪器资源不足，及原有旧仪器与新课程新教材匹配不良等问题，为全面有效地展开实验教学提供条件空间；②也为开发出工业化商品化仪器创造条件雏形；③培养学生的创新精神和实践能力。学生的教具（学具）活动，是物理实验教学活动的一种形式，是物理实验教学活动的重要组成部分。
实验仪器
可以培养的学生的动手能力和想象力
教具的制作过程是一个学生动脑的过程，从初步在脑海里构想，动手设计，再到中间过程的反复考量修改都需要自己的思考才能进行下一步地制作，到后完成中间的经历其实就是一个发现问题，解决问题的过程，既锻炼了学生的动手能力同时也是学生养成积极思考的好习惯。这一过程不仅使所学知识得到了巩固和运用，更重要的是使学生的思维能力、动手能力、创造能力得到了培养。教具的这种功能，是任何现成仪器所不具备和不能代替的。
教具是素质教育的一个重要体现
素质教育就是要求学生全面发展，要激发学生的个体的优势以改变应试教育同一化的模式，是每个学生的个体优势突显出来。而且实验仪器的过程是一个学生猎奇的过程，只有兴趣才会激发学生的兴趣，使枯燥的知识变为生动有趣的劳动课的模式。而且在学具制作过程中会经历失败的苦恼和通过不懈的努力获得终成功的喜悦。这对于促进学生非智力因素的发展和心理素质的增强，都起着十分重要的作用。同时，对于学生科技意识的培养，也是十分重要的。这种教育功能，也是任何现成仪器所不具备和不能替代的。
能有效培养学生的学习主动性
着名物理学家麦克斯韦说过“实验的教育价值与仪器的复杂性成反比，学生的仪器，虽然经常出毛病，但却会比用仔细调节好的仪器能学到更多的东西”。在中学实验室里教学仪器数量有限，使用一般都强调要按步骤操作，如果非正常损坏，则要赔偿，甚至罚款。因此，学生普遍存在害怕心理，使用时小心谨慎，不敢越雷池一步。学生处于被动实验状态，学习的积极性和主动性受到了压制。而教具取材容易，制作简单，损坏了可以再制作，这是商品仪器无法比拟的，它能有效地提高了学生学习的积极性、主动性。另外，学生通过的教具，能加深对教材内容的深入理解。
还可以解决在教育经费上问题
教育既能受到学生的欢迎，又能收到学校的欢迎因为的实验仪器可以在成本上，利用工业边角料和日常生活废旧品制作或改制成有用的教具，自然就会成为低成本教具或称为廉价教具。在教育经费不足的情况下，可以弥补教具经费之不足。

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