凯基 双染细胞凋亡检测试剂盒

凯基 Annexin V-FITCPI双染细胞凋亡检测试剂盒  
货号(目录号)	规格	单价	货期
KGA105	10tests	420	**
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一、简介
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内
 
侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素FITC标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不**用于检测组织样本）。
二、 操作方法
悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不易过长，否则*引起假阳性）；
用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；
加入500μL的Binding Buffer悬浮细胞；
加入5μL Annexin V-FITC混匀后，加入5 μL Propidium Iodide，混匀；
室温、避光、反应5～15min；
请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A．荧光显微镜观察
滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
① 将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
② 用PBS洗涤细胞两次；
③ 在500μL 的Binding Buffer中加入5μL Annexin V-FITC，5 μL Propidium Iodide，混匀；
④ 将上述溶液滴加于盖玻片表面，使盖玻片表面均匀覆盖；
⑤ 避光、室温反应5 min。
⑥ 将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下、双色滤光片（FITC和罗丹明）观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色，PI荧光信号呈红色。
B．流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测，激发波长Ex=488 nm; 发射波长Em=530 nm。
Annexin V-FITC的绿色荧光通过FITC通道（FL1）检测；PI红色荧光（流式Ex=488nm,Em≥630nm）通过FL2或FL3通道检测，建议使用FL3。
荧光补偿调节：使用经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。
三、试剂盒说明
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素FITC标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不**用于检测组织样本）。 
四、试剂盒组份
组份 Cat: KGA105
(10 assays) Cat: KGA106
(20 assays) Cat: KGA107
(50 assays) Cat: KGA108
(100 assays) 储存条件
AnnexinV-FITC 50 μL 100 μL 250μL 500 μL -20℃避光
Propidium Iodide 50 μL 100 μL 250μL 500 μL 4℃避光
Binding Buffer 5.0 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 4℃
注：1、Annexin V-FITC组份建议按需分装小份冻存于-20℃，避免反复冻融；
    2、Propidium Iodide和Binding Buffer组份不用时可放置于4℃保存，Propidium Iodide需要避光。 
五、使用注意事项
微量试剂取用前请离心集液。
Annexin V-FITC，Propidium Iodide （PI）避光保存及使用。对于Annexin V-FITC这个组份，建议您在收到产品之后，分装为小份避光保存于-20℃，即用即取。
Propidium Iodide（PI）有毒，操作时要戴手套。
本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，不**用于检测组织样本。
**使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
六、Annexin V-FITCPI双染细胞凋亡检测试剂盒 KGA105 技术参数
产品组份: AnnexinV-FITC：50μl Propidium Iodide：50μl Binding Buffer：5.0ml
应用实验类型: 细胞凋亡检测
检测方法: 流式分析，荧光成像
特殊物理化学性质说明: FITC：Ex/Em=495nm/519nm PI：Ex/Em=535nm/617nm（结合dsDNA）
试剂盒保存温度: 2-8℃for 12个月，避光

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