双光子荧光显微镜是结合了激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术的一种新技术。双光子激发的基本原理是:在高光子密度的情况下,荧光分子可以同时吸收2个长波长的光子,在经过一个很短激发态后,**出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。因其光损伤小、使得观察荧光细胞成为可能。中国医学科学院医学实验动物研究所-双光子显微镜成像平台借助于双光子显微镜成像技术及不同转基因小鼠开展对多种脏器的成像研究。以小鼠颅内成像为优势,可观察小鼠颅内神经细胞、小胶质细胞/巨噬细胞、周细胞、血管、转移瘤细胞、胶质瘤细胞等的变化情况,在**学、神经生物学、发育生物学、神经退行性疾病等领域具有广泛应用。小鼠其它组织脏器,如脾、颅骨、股骨、胸骨等也可借助本平台进行成像研究。双光子显微镜可以在小鼠的的任何部位进行有生命体成像。进口bruker双光子显微镜商家电话
在高光子密度的情况下,荧光分子可以同时吸收两个长波长的光子,然后**出一个波长较短的光子,其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的(如下图)。如烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH),在单光子激发时,在波长为350nm光的激发下发出450nm荧光;而在双光子激发时,可采用750nm的激发光得到450nm荧光。由于双光子激发需要很高的光子密度,为了不损伤细胞,双光子显微镜使用高能量锁模脉冲激光器。这种激光器发出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,从而可以减少光漂白和光毒性带来的不利影响。进口bruker双光子显微镜商家电话双光子显微镜成像技术及不同转基因小鼠开展对多种脏器的成像研究。
双光子显微镜是一种**的成像技术,能够实现细胞或组织的深层观察。它的主要特点是使用双光子激发来产生荧光,从而实现对生物样品的高分辨率成像。双光子显微镜的工作原理是利用激光的脉冲宽度较窄的特性,将高能激光束聚焦到生物样品中,激发出荧光。这个过程需要使用一个特殊的双光子激发源,它能够将一个光子转换为两个光子,其中一个光子用于激发荧光,另一个光子则用于成像。双光子显微镜具有以下优点:高分辨率:由于双光子激发的特性,可以实现对生物样品的高分辨率成像,特别是对于深层组织的观察。穿透深度大:双光子激光的波长较长,能够较好地穿透生物组织,从而实现对深层细胞的观察。荧光寿命长:双光子激发产生的荧光寿命比单光子激发产生的荧光寿命长,这使得双光子显微镜能够较好地区分不同的荧光标记物。减少光毒性:由于双光子激发的能量较低,因此对生物样品的损伤较小,可以减少光毒性。总之,双光子显微镜是一种非常有用的成像技术,可以用于生物学、医学、材料科学等领域的研究。
双光子显微镜为什么穿透能力强?因为组织对可见光区域的较强吸收和散射带来两个严重的问题*1个是激发光的减弱,*2个就是另外就是由于物镜本身光的光学特性,单光子激发的背景较强,所以才有共聚焦系统提高成像的分辨率因为组织对可见光区域的较强吸收和散射带来两个严重的问题*1个是激发光的减弱,*2个就是另外就是由于物镜本身光的光学特性,单光子激发的背景较强,所以才有共聚焦系统提高成像的分辨率刚好双光子在这两点具有很大的优势上面的内容基本在谈到双光子优势都会相对说明,在实际操作中成像的深度和样品的关系很大,双光子成像利用高亮度的荧光标记材料,已经有做到mm级别的穿透深度双光子显微镜可精确穿透较厚标本进行**、有生命体的观察!
2008年钱永健等人由于荧光蛋白(GFP,绿色荧光蛋白)的发现和使用,获得了诺贝尔化学奖,是对荧光成像技术的一次巨大肯定和推动。与荧光蛋白以及荧光染料等标记物在细胞中的定位与表达技术相结合,使得科学家可以特异性的分辨生物体乃至细胞内部不同结构与成分,并且能够在生命体和细胞仍具有活性的状态下(状态)对其功能进行动态观察。这就使得荧光成像技术成为了**的,生物学家现今较为重要的技术手段之一。目前,大多数细胞生物学和生理学研究主要还是在离体培养的细胞体系中研究。然而与细胞生物学研究有所不同的是,大脑的功能研究的整体性和原位性显得较加关键:只研究分离的神经元无法解释神经系统的功能和规律。由于被观测的信号会受到样本组织的散射和吸收,根本无法穿透如此深的组织进行成像。而双光子显微镜(Two-photonMicroscopy,简称TPM)的发明,则为此类研究带来了希望。双光子显微镜放大倍数是多少?进口bruker双光子显微镜商家电话
双光子显微镜能够进行光裂解、光转染和光损伤等光学操纵。进口bruker双光子显微镜商家电话
在国家自然科学基金委国家重大科研仪器研制专项《**高时空分辨微型化双光子在体显微成像系统》的支持下,北京大学分子医学研究所、信息科学技术学院、动态成像中心、生命科学学院、工学院联合中国人民医学科学院组成跨学科团队,历经三年多的协同奋战,成功研制新一代高速分辨微型化双光子荧光显微镜,并获取了小鼠在自由行为过程中大脑神经元和神经突触活动清晰、稳定的图像。原始论文于5月29日在线发表于自然杂志子刊NatureMethods(IF25.3),并已申请多项。进口bruker双光子显微镜商家电话
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