血浆病原DNA提取试剂盒提取的核酸纯度高。核酸纯度一般根据OD260/OD280比值来判断。一般说来,试剂盒提取的DNA其OD260/OD280比值应在1.6--1.8之间。
游离DNA提取方法一般有TRizol方法、离心柱法、磁珠法。其中,Trizol方法与离心柱相比,提取效果相当,但是因其对操作者带来的毒性,现在越来越被弃用。磁珠法比较适合机器自动化提取,如果没有核酸提取仪,只是使用磁力架配套提取,磁珠法的操作就比较麻烦且容易导致样本交叉污染。另外,根据研究,磁珠法的核酸提**率不如离心柱法。如果要提取的游离核酸的量比较低,选择离心柱法。对于游离DNA含量较低的样本或比较珍贵的样本或样本总数不是很多的实验室,核酸提取方法应是离心柱法。
血浆病原DNA提取试剂盒使用注意事项:
1、裂解液、洗涤液含有一定性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入鼻和口中。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。
2、如血液量不足200μL,请用0.85% 生理盐水补至200μL;如血液量**出200μL,请使用中量血液DNA提取试剂盒或血液富集DNA提取试剂盒。
3、如果提取的血液为鸟类、禽类的血液,因有核红细胞较多,提取血液量应适当减少,研究者应该进行优化实验,选择合适用量。
4、提取的DNA如暂不使用,应-20℃保存。
不同的DNA来源有不同的试剂盒,从实验室培养的细胞,到土壤样本,甚至指纹,也有许多用于某些应用的试剂盒。例如,土壤中的腐殖酸或血液中的血红蛋白会污染纯化的DNA,从而干扰下游的DNA实验(如PCR)。当然,也有一些试剂盒会在进行纯化步骤之前去除这些组分。如果想从PCR或琼脂糖凝胶中纯化DNA,有许多方法可以提高琼脂糖凝胶纯化的回收率。
血浆病原DNA提取试剂盒有较高的提**率。核酸提**率的确定,常用的是使用紫外分光光度计的方法。但是,血清、血浆样本中游离核酸含量较低,如果直接用紫外法检测,得出的数值并不准确,而且多次测量的结果会变异很大。关于提**率,1ml正常血浆样本cfDNA得为7.35ng左右,但如果白细胞大量凋亡,血浆中的游离DNA量会有所增加,病人血浆中的DNA会大幅增加。
实验室工作中,经常会需要用到纯化的DNA,这时我们通常需要使用一个商业的DNA提取试剂盒对目的DNA进行分离纯化。市面上有很多类型的提取试剂盒,当使用不太熟悉的样本类型时,选择合适的盒子是尤为关键的。
目前大多数DNA提取试剂盒遵循相同的基本步骤:裂解、柱纯化、洗涤杂质、柱洗脱。然而,不同的盒子在完成每个步骤的方式上有很大的不同。
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