近年来造类感染的病原微生物日益复杂、种类繁多,抗菌药物滥用与耐药已成为全球关注的焦点。如病原微生物引起的食源性疾病是影响食品安全主要的因素之一。
病原微生物检测——分子生物学与免疫学相结合的方法:
1、免疫PCR:
免疫PCR(immuno polymerase chain reaction,IM PCR)是1992年Sano等[16]建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术。该技术把抗原抗体反应的高特和聚合酶链反应的高敏感性有机结合起来,它的基本原理是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针,用此探针与待测抗原反应,PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子,电泳定性,根据特PCR产物的有无,来判断待测抗原是否存在。目前,国内外报道的免疫PCR的敏感性一般比现行的EL ISA法高102~105倍。由于PCR产物在抗原量未达到饱和前与抗原抗体复合物的量成正比,因此免疫PCR还可用于抗原的半定量试验。
2、PCR2EL ISA:
PCR2EL ISA法是PCR与EL ISA技术结合的检测方法。其综合了PCR,分子杂交,和EL ISA 3种技术的优点。主要用于检测样品中的特定基因。它引入(或生物素)标记的dN TP或引物进行PCR扩增,利用酶标抗抗体(或酶标记亲和素)进行EL ISA检测,代替了用于常规PCR产物检测的电泳方法,方便快捷,易于处理大量样品,且其灵敏度比使用琼脂糖凝胶电泳检测方法高100倍,当有适当的标准品时,还可进行定量测定。
病原微生物检测——血清免疫学方法:
免疫学技术是利用特抗原抗体反应,观察和研究组织细胞、特定抗原(抗体)的定性和定量技术。为了显示和观察这种抗原抗体反应,需要预先将某种标记物结合到抗体上,借标记物的荧光或酶的有色反应、或高电子密度,在光镜或电镜下进行定性、定位或定量研究。各种形式的免疫分析方法如放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、间接酶联免疫吸附(EL ISA)、荧光免疫分析(FIA)、生物发光免疫分析(BIA)、化学发光免疫分析(CIA)等,直接检测微生物或通过间接检测微生物的成份及微生物代谢产物(如)检出微生物。各大文献数据库提供的数据显示,几乎建立了所有病原体的血清学检测方法,表明该方法也成为了一种实验室常用的成熟的检测技术。
病原微生物分类如下:
依病原微生物的性危险程度的大小,我国的菌种分为四类。
一类:实验室感染的机会多,感染后发病的可能性大,重并能危及生命,缺乏有效的预防方法,以及性强,对人群危害性大的烈,包括国内未发现或虽已发现,但无有效防治方法的烈菌种。
二类:实验室感染机会较多、感染后的较重及危及生命,发病后不易及对人群危害较大的病菌种。
三类:仅具有一般危险性,能引起实验室感染的机会较少,一般的微生物学实验采用一般实验技术能控制感染或有对之有效的免疫预防方法的菌种。
四类:生物制品、菌苗、疫苗生产用各种减毒、弱毒菌种及不属于上述,一、二、三类的各种低致病性的微生物菌种。
病原微生物检测——分子生物学方法:
分子生物学及分子遗传学的发展,使人们对微生物的认识逐渐从外部结构特征转向内部基因结构特征,微生物的检测也相应的从生化、免疫方法转向基因水平的检测。
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