上海磁珠法 质控和监测严格

FFPE样本DNA提取试剂盒无有害试剂，提高实验的安全性；自动化提取满足不同通量需求，显著提高生产率；较大程度减少手工操作时间。
FFPE样本DNA提取试剂盒的常见问题分析及解决方法：
从前处理、提取、建库到测序分析，FFPE样本常见问题复杂多样,其中绝大部分问题和样本直接相关，可以通过回溯实验过程及分析来优化实验。
1、文库复杂度低
原因:样本质量差：测序深度太高；
优化方法：规范前处理、核酸提取过程；检查设备状态等；调整测序深度。
2、文库片段短
原因：样本质量差；打断时间过长
优化方法：规范前处理；调整打断时间。
3、文库总量低
原因：核酸投入/杂交投入量低；样本质量差；实验操作不规范；
优化方法：投入足够量的核酸，规范实验操作。

FFPE样本DNA提取试剂盒的应用步骤：
1、从源头抓起，完善样本的前处理
离体时间：取材后应在30min内及时固定，防止组织变质。
样本要求：选择合适大小的组织块制作石蜡包埋组织样本，一般不**过15x10x5mm。
固定液选择：建议使用10%中性福尔马林固定液，对组织进行固定，固定液应为被固定标本体积的5-10倍，并定期更换。
固定时间：根据样本情况调节固定时间，一般在24-48h为宜，固定时间过长会加重FFPEDNA的片段化。
包埋要求：选用纯净且熔点适宜的蜡，包埋要迅速，禁用明火。
切片厚度：包埋好的组织样本根据需要确定切片厚度，标准切片厚度为4um，用于核酸提取的切片可以在10-20um，保证切片厚度的持续稳定。
2、选择合适的提取试剂盒
目前市场上有多种提取试剂盒，应选择合适的试剂盒才能保证实验的成功率。

FFPE样本DNA提取试剂盒使用中为什么要脱蜡？
如果要对FFPE组织进行分子生物学研究，开始的就是要进行DNA的提取。 但是固定剂的交联作用对核酸是有害的，福尔马林石蜡和交联作用会妨碍核酸的提取，抑制DNA聚合酶的活性从而影响PCR扩增。除此之外，石蜡阻碍消化液对组织的渗透，从而抑制蛋白酶K和组织内蛋白的接触，影响组织消化和DNA释放。所以为了消除石蜡对DNA提取和PCR扩增的不良影响，必须在保证不增加外源性PCR抑制因子，并尽量减少DNA额外损伤的前提下对组织进行彻底脱蜡。

FFPE样本DNA提取试剂盒为福尔马林固定的石蜡包埋（FFPE）组织样品中的总RNA和基因组DNA的连续分离和纯化提供了一种快速方法。使用该试剂盒将RNA和DNA依次纯化成单的组分。能够纯化大部分的RNA，从大的mRNA和核糖体RNA到microRNA和小干扰RNA，取决于FFPE组织的年限，因为RNA的片段化程度将随着时间增加。在不使用或氯仿的情况下从其他细胞组分中纯化RNA。纯化的RNA具有较高的完整性，可用于许多下游应用，包括实时PCR，逆转录PCR，RNA印迹，RNA酶保护和引物延伸，以及表达谱测定。纯化的基因组DNA也具有较高质量，可用于PCR反应，测序，Southern印迹和SNP分析。

FFPE样本DNA提取试剂盒提供了一种快速提纯方法，可在短短时间内从福尔马林固定的FFPE组织样品中分离和纯化总RNA。由于使用福尔马林固定组织导致RNA和蛋白质的交联，并且嵌入组织样品的过程也可导致RNA随时间的破碎。FFPE样本DNA提取试剂盒允许逆转部分福尔马林的修饰，从而获得高质量和高产量的RNA。该试剂盒能够净化所有大小的RNA，从大的mRNA和核糖体RNA到microRNA和小干扰RNA，取决于FFPE组织的年限，因为已知RNA的碎片化会随着时间的推移而发生。
储存条件：
磁珠悬浮液和蛋白酶K置于2-8℃保存，其他试剂可室温保存，有效期12个月。

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