中净环球净化可提供医学实验室、PCR实验室的咨询、规划、设计、施工、安装改造等配套服务。
实验室通风控制系统可根据不同的情况采用不同的控制方式,如单台通风设备定风量通风控制系统、多台通风设备变频通风控制系统、多台通风设备+变风量通风控制系统。为了实验降低一次性投资且节省运行费用的目的,变频通风系统应运而生;在通风管路的主管上加风管压力传感器,另设变频柜,变频柜里安装变频控制器,通过初设一个风管压力值,由变频控制柜对系统风量进行控制。
在大型通风系统中,多台通风设备连在一起,采用变频系统控制时,只能对主风管的风量进行控制,只有感受到主风管的风压产生变化,才对风机作出相应调整,而对通风设备的末端的面风速不能作任何调整;为了解决通风设备末端的变风量要求和面风速恒定的要求, 实现进一步节能,出现了变频+变风量通风控制系统,包括一个风速传感器、红外线探测器、一个变风量控制阀、一个自动控制器面板和操作终端。为减少通风系统运行中的噪声,可采取如下措施:减振设计、在风机吸风口处加装。
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DNA检测实验室格局规划
01电气照明
室内照明灯具采用了国内的防尘净化灯,为双管40瓦;在应急照明方面,采用了的应急净化灯,当遭遇临时停电或紧急事故断电时,部分净化灯管可迅速转入蓄电池供电,以保证每间自动开启一盏应急照明灯管,方便人员在15分钟内撤离。而平时,此应急净化灯与其它净化灯同样使用,无任何区别,省去了购买安装应急灯组的麻烦,使整个试验区内浑然一体、实用;功能间及缓冲间设UV灯。
室内电路上,均应采用达到标准的电气线缆,采用并联方式,主线使用4~6MM² 线缆,插座及照明使用2.5MM² 线缆,所有线路均为暗装,并使用PVC阻燃线管,接头在技术夹层中采用线盒安装,杜绝施工及维修中的隐患。配电柜及空气开关均使用国内厂家的元器件,寿命长、可靠,风机动力配电箱与空调、照明、插座等总配电箱将分别设置,各间净化风机箱与空调可依据使用需求即可集中操控,亦可单使用。
02装修材料
实验区搭建室内环境污染控制二级屏障--密闭间,其围护、吊顶全部采用厚度为50mm的EPS夹芯净化彩钢复合板(双面钢板厚度0.5mmEPS容重16Kg/m3),平整、无漏缝、易清洁、不发尘。
所有墙与**、地、窗对接角均采用内圆弧(阴角)或外圆弧(阳角)和工艺,室内无死角、不集尘、易清洁;50槽、门框料、窗框料、圆弧角等结构件均选用净化铝型材料;
实验区域内地面全部选用纯进口**的复合型/通体型PVC地面,多层工艺处理,PVC无缝焊接,防渗漏、防腐蚀、易清洁、美观大方。
室内围护屏障所设固定采光窗/观察窗均采用净化铝型材、浮法玻璃制作,不可开启;室内门可通过尺寸为宽850mm、高1900 mm,负压较大的室门向外侧开启,正压室门向内侧开启,走廊或主通道门向外侧开启,门上均设置有长方形观察窗;作为二级屏障以降低外环境空气或沙尘污染对室内的影响。
03配套设备
本实验室内根据需要将可配备具有国优的微环境百级生物型**净工作台、补风型通风柜、内排式净化捕尘柜、ⅡA型生物柜等作为微环境污染控制的一级屏障;**净工作台、净化捕尘柜、生物柜均选用进口风机,噪音低、体积小、风量均匀,及的程序控制器,选用0.3μm效率≥99.97%的过滤器;并与冰箱等其他落地设备、试剂柜/仪器台/操作台/电脑桌等现代实验室家具、PCR仪/测序仪/离心机/工作站/计算机等各种台式仪器及功能间格局等统一设计规划;尤其是美国ABI公司提供的测序仪和PCR仪对室内空气及温湿度的环境控制具有一定的要求;各实验室间配备不锈钢传递窗作为物流单向通道,其具备双门机械联动互锁,双控紫外灯开关,传送便捷,人 / 物分流,从程度上降低交叉污染。
中净环球净化可提供医学实验室、PCR实验室的咨询、规划、设计、施工、安装改造等配套服务。
PCR实验室介绍
基因扩增实验又称PCR实验,其特点是能将微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物学研究和实验的常规方法,广泛应用于生物学各个领域,例如:艾滋病检测、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的检测和诊断,DNA指纹、个体识别、亲子鉴定及法医物证,动、植物检疫,动物及其产品检测,动物饲料、化妆品、食品卫生检测,作物与微生物检测等。
一、PCR实验室布局
PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单的工作区域并设有走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔立的,各工作区有明显的标志,不能直通,如果紧密相连,需安装物品传递窗。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区,扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区**部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm,每20㎡一支40W的紫外灯。
实验室各区功能及主要设备
1、试剂准备区:主要进行试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其它区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的试剂。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。
对于气流压力的控制,本区并没有严格的要求。
2、样品制备区:主要进行样品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区主要设备有冰箱、生物柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴等。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
3、扩增区:主要进行DNA扩增。此外,已制备的DNA模板 (来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。本区主要设备有:扩增仪、冰箱、离心机、加样器等。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。
4、扩增产物分析区:扩增产物的测定。本区主要设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。
本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
三、PCR实验室通风系统及压力控制
各区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。
PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式,严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
四、PCR实验室装饰
实验室围护结构应牢固、气密性好;所有阴阳角宜采用圆弧过渡;墙体内壁光洁、不积尘、耐腐蚀、易清洗;地面使用PVC卷材或环氧树脂自流坪,材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
五、PCR实验室注意事项
1、几个区域的大小设置情况,试剂准备区、扩增区、扩增产物分析区,空间可以相对小一些,样品制备区要放置生物柜和低温冰箱,空间应大一些。
2、试剂准备区、样品制备区设紧急洗眼器,以保证操作人员的。
3、PCR实验室没有严格的净化要求,可以根据用户的使用情况和资金的投入选择。
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PCR实验室污染后的处理措施
污染,是PCR实验室出现实验假阳性、结果不可信的重要原因,PCR实验室应当将防污染作为日常管理、实验安排、清洁、实验习惯的**。PCR 实验污染和细胞污染是有差别的,PCR 实验污染主要是核酸而不是和其他入侵者。因此所有的预防措施都会稍稍有所不同。“易查不易察”,污染来的悄无声息,我们该如何应对?下文简单介绍一下PCR实验室的主要污染来源、实验中如何避免和减少污染的可能性及实验发生污染的应急处理方案。
一、PCR实验室的污染来源
1、样本间交叉污染:
收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢;不同样本移液时忘记更换尖或未使用带滤芯尖;移液器等实验器具及耗材未及时;不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散,相互交叉污染。
2、实验试剂污染:
主要是在 PCR 组分试剂加样过程中,由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。加样过程中,因为 PCR 试剂对温度十分敏感,需要通过冰浴使得 PCR 试剂和 PCR 板/管处于 0℃,但这个过程也是充满了污染的风险的。
3、扩增产物污染:
大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖,这是 PCR 反应中主要常见的污染问题。因为 PCR 产物拷贝量大,远远** PCR 检测数个拷贝的限,所以微量的 PCR 产物污染,可形成假阳性。
4、克隆质粒污染:
作为阳性质控品的克隆质粒外溢。
二、PCR实验室的防污染方法
按照实验室的工作制度或标准操作程序,所有操作符合《实验室生物通用要求》(GB19489-2008)。
1、严格执行各区功能划分:
试剂储存和准备区:贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备,以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
标本制备区:核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及样本的操作,应符合生物二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
扩增区:cDNA合成、DNA扩增及检测。
扩增产物分析区:扩增片段的进一步分析测定,如杂交、酶切电泳、变性液相分析、测序等。
试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品,包括移液器等器具应,空气、物品流向依次为:试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区,不可逆行。
2、清洁的实验用品:
实验室自配试剂(去离子水、缓冲液等)和所有使用器具在使用之前均应高压或紫外。尖、反应管等实验耗材应一次性使用。
3、正确的实验操作:
实验应在**净工作台内进行,工作台内应放置PCR的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品。
实验的过程中选择合适尺寸的手套并能及时更换,在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套,以避免不同实验区交叉污染。
装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心,将管壁及管盖上的液体离至管底,降低污染手套或加样器的风险;谨慎开启反应管,防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。
吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行,遵守“慢吸快打”原则,尽量一次性完成,忌多次抽吸,以避免气溶胶产生的交叉污染。
PCR试剂建议小量分装,以减少反复冻融、重复取样次数;多样本PCR反应时,先配制反应混合液分装至反应管中,加入样本核酸,请勿同时开盖,尽量保证单人单管,实现完全闭管操作。
实验试剂应与样品和PCR产物分开保存,不应放于同处。
PCR扩增实验完成后及时将反应管取出,用一次性手套将产物反应管包裹丢弃,保证管盖紧闭。
4、规范的实验设计:
应遵循实验室内部质量控制的相关规定,实验中设立阳性对照、阴性对照和空白对照,全程质控实验过程,验证PCR反应的可靠性,并协助判断扩增系统的可信性。
三、PCR实验室的污染应急处理方法
1、若核酸样本溢出:
立即用布或纸巾覆盖,由向中心倾倒10%的次氯酸剂,约30分钟后,污染物品,再用次氯酸剂擦拭,并用75%酒精喷洒,移动紫外车**照射1小时。
2、其他不明情况污染:
1.暂停所有实验操作;
2.清理实验室内所有物品,寻找污染来源;
3.加大实验室的通风;
4.对实验室内所有表面(台面、地面及墙面) 进行;
5.75%酒精空中喷雾;
6.开启紫外装置,延长紫外照射时间(4小时以上);
7.以上措施每日进行,直至污染;用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测,连续3次均阴性后方可进行常规检测。
深圳市中净环球净化科技有限公司是一家专业从事洁净室系统设计、施工及洁净室设备生产、销售,并提供专业化配套服务的高科技企业,公司始终秉承“以人才为基础,让科技服务于客户,为社会发展做贡献”经营理念,全心全意的为客户创造较优质产品,提供满意的服务。公司自成立以来,凭借自主创新的精神,开拓进取的科学管理,立志发展成为全国较具竞争力的行业**企业之一。(提供净化工程、净化产品、节能环保、LED车间、SMT车间、食品化妆品车间咨询、设计、施工)
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