病原微生物检测在感染判定中意义重大,越来越多的检测技术引入,除了传统的检测方法如涂片染色、培养分离、免疫学技术、核酸检测等,还有新兴的二代测序技术等。
病原微生物检测——生化方法:
生化方法检测病原微生物实际上是测定微生物特酶。由于各种微生物所具有的酶系统不完全相同,对许多物质的分解能力亦不一致。因此可利用不同底物产生的不同代谢产物来间接检测该微生物内酶的有无,从而达到检测特定微生物的目的。如沙门氏菌能产生辛酯酶,这一性能是除沙门氏菌外的各属肠杆菌科所不具备的。该方法是以42甲基伞形酮辛酯(MUCAP)为底物,经沙门氏菌的酶降解后,释放出4MU,在紫外灯下观察其发出的蓝色荧光。该方法简便易行,从加入底物到紫外灯下观察到出结果仅需几分钟即可完成。其灵敏度和特分别可达95%和90%。对与H2 S(+)反应的沙门氏菌该法更为敏感,灵敏度和特均接近。大肠埃希氏菌具β2葡萄糖醛酸酶,但以O157:H7为代表的肠性大肠埃希氏菌(EHEC)却不具此酶,故β2葡萄糖醛酸酶阴性已成为初步筛查EHEC的重要特征。白色具脯氨酸肽酶及N2已酰β2D半乳糖苷酶,分别以合适的试剂检测,两酶均阳性即为白色。
病原微生物分类如下:
依病原微生物的性危险程度的大小,我国的菌种分为四类。
一类:实验室感染的机会多,感染后发病的可能性大,重并能危及生命,缺乏有效的预防方法,以及性强,对人群危害性大的烈,包括国内未发现或虽已发现,但无有效防治方法的烈菌种。
二类:实验室感染机会较多、感染后的较重及危及生命,发病后不易及对人群危害较大的病菌种。
三类:仅具有一般危险性,能引起实验室感染的机会较少,一般的微生物学实验采用一般实验技术能控制感染或有对之有效的免疫预防方法的菌种。
四类:生物制品、菌苗、疫苗生产用各种减毒、弱毒菌种及不属于上述,一、二、三类的各种低致病性的微生物菌种。
病原微生物检测——分子生物学方法:
分子生物学及分子遗传学的发展,使人们对微生物的认识逐渐从外部结构特征转向内部基因结构特征,微生物的检测也相应的从生化、免疫方法转向基因水平的检测。
病原微生物检测——血清免疫学方法:
免疫学技术是利用特抗原抗体反应,观察和研究组织细胞、特定抗原(抗体)的定性和定量技术。为了显示和观察这种抗原抗体反应,需要预先将某种标记物结合到抗体上,借标记物的荧光或酶的有色反应、或高电子密度,在光镜或电镜下进行定性、定位或定量研究。各种形式的免疫分析方法如放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、间接酶联免疫吸附(EL ISA)、荧光免疫分析(FIA)、生物发光免疫分析(BIA)、化学发光免疫分析(CIA)等,直接检测微生物或通过间接检测微生物的成份及微生物代谢产物(如)检出微生物。各大文献数据库提供的数据显示,几乎建立了所有病原体的血清学检测方法,表明该方法也成为了一种实验室常用的成熟的检测技术。
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